Detección molecular de Leishmania spp en lesiones cutáneas del personal del Ejército Nacional de Colombia expuesto en zonas endémicas

Abstract

Las leishmaniasis es un grupo de enfermedades parasitarias producidas por protozoos del género Leishmania. Anualmente se reportan 2 millones de casos nuevos en el mundo; en Colombia la incidencia aumentó notoriamente desde el año 2005 ante el gran número de casos reportados por las fuerzas militares, los cuales en muchos casos, tienen dificultades para el diagnóstico temprano de la enfermedad siendo necesario el establecimiento de herramientas más específicas y sensibles que puedan ayudarlos a solucionar este impase. Siendo el Ejército Nacional uno de los más afectados por la enfermedad, no tenían establecido un Laboratorio con metodologías, para el aislamiento e identificación del parásito y metodologías alternativas como la PCR; anteriormente el diagnóstico solo se realizaba por frotis directo y en casos especiales por biopsia de la lesión. El objetivo fue determinar la utilidad de la PCR en el diagnóstico de leishmaniasis cutánea en personal del Ejército Nacional de Colombia expuesto en zonas endémicas. Se incluyeron 346 pacientes con lesiones presuntivas de leishmaniasis cutánea previo consentimiento informado, se recolectaron datos demográficos y epidemiológicos de los pacientes y se realizó frotis directo, cultivo y PCR específica para el género Leishmania amplificando una región conservada del cinetoplasto y se realizó identificación de especie mediante el uso de la PCR- RFLP del gen cisteín proteasa tipo B (CPB). El 43.9% de los pacientes habían presentado más de un episodio anterior de la enfermedad y el 47.0% tenían un tiempo de evolución de 30 días. La positividad de las metodologías fue del 97.6% (338/346) mediante PCR, el 7.2% (25/346) por cultivo y el 47.0% (162/346) mediante frotis directo. Mediante PCR-RFLP se caracterizó las 25 cepas de Leishmania recuperadas de los pacientes por cultivo, donde 17 (68.0%) presentaron perfiles para Leishmania braziliensis y 8 (32.0 %) perfiles para Leishmania panamensis/Leishmania guyanensis. Con la misma metodología se caracterizó la especie a partir de muestra directa, donde se tipificaron 104 muestras de pacientes donde el 47 (45%) para perfiles de Leishmania panamensis/Leishmania guyanensis y 43 (42%) para Leishmania braziliensis y 14 (13%) no dio ningún perfil de identificación. Se mostró la gran utilidad de la PCR en el diagnóstico de la enfermedad y la importancia de la tipificación de las cepas para orientar el tratamiento ante los fracasos terapéuticos y la resistencia al tratamiento observada en nuestros pacientes, sin embargo debe mejorarse la metodología para la identificación desde la muestra. / Abstract. Leishmaniasis are a parasitics diseases caused by protozoans of the Leishmania genus. This disease annually reported 2 million new cases in the world. In Colombia the incidence of leishmaniasis has increased markedly since 2005, accounting to the present a large number of cases reported mainly by the military forces in spite of all operational difficulties for the early diagnosis of this disease for which an increasing need of establishing more and specific sensitive molecular tools has to be solved. We determined the usefulness of PCR in the diagnosis of cutaneous leishmaniasis in personnel from the Colombian military forces exposed in endemic areas. 346 patients having cutaneous leishmaniasis lesions were included all agreed to signed informed consent; we also collected demographic and epidemiological data from patients from whom direct smears were performed and cell culturing led the Leishmania gender-specific. PCR tests amplified a conserved kinetoplast region of Leishmania and species identification was performed by using the PCR-RFLP cysteine protease gene type B (CPB). The 43.9% of the analyzed patients had had more than one prior episode of the disease and 47.0% had disease duration of 30 days. The positivity of the methods was 97.6% (338/346) by PCR, 7.2% (25/346) by cell culturing and 47.0% (162/346) by direct smear. 25 strains of Leishmania were recovered from patients by cell culturing and PCR- RFLP characterized, where 17 (68.0%) had profiles for Leishmania braziliensis and 8 (32.0%) profiles for Leishmania panamensis. Using the same methodology most species were characterized from direct sample, where 104 samples were typified. From subject samples, 47 patients (45%) had a Leishmania panamensis profile, 43 (42%) for Leishmania braziliensis and 14 (13%) did not meet a parasite profile ID. Sample processing and produced data showed the great utility of PCR for leishmaniasis diagnosis as well as the importance of strain typifying in order to guiding a therapy for treatment of previous therapy fail and resistance observed in our patients. However, this methodology should be improved for a proper Leishmania type identity from all analyzed samples.