Para avanzar en el estudio de la biodiversidad vegetal colombiana, considerada como fuente potencial de productos farmacológicamente activos, es necesario establecer sistemas de evaluación de actividad biológica que permitan detectar productos activos en patologías de alto impacto social y económico, como es el cáncer. Este trabajo describe la implementación de una metodología preliminar in vitro para determinar la potencial actividad anticáncer de extractos vegetales, evaluando su citotoxicidad sobre líneas celulares derivadas de tumores humanos, midiendo indirectamente la masa celular mediante los ensayos colorimétricos de reducción del MTT (metil tiazol tetrazolio) y tinción con SRB(Sulforodamina B). Se adaptaron los cultivos de las líneas celulares HT-29, MCF-7, SiHa y HEp-2; igualmente se seleccionaron los para metros para la valoraci6n de citotoxicidad: concentración de MTT, densidad celular y periodo de tratamiento; se comprobó la sensibilidad de las líneas celulares al agente quimioterapéutico Doxorubicina-HCl y se evaluó la  citotoxicidad de extractos de especies vegetales colombianas, evidenciando la utilidad de la valoración como herramienta para bioguiar la búsqueda de extractos activos.To advance in the study of the Colombian vegetal biodiversity, considered as a potential source of pharmacologically active products, the establishment of biological activity evaluation systems is necessary, which allow the detection of active products against pathologies with high social and economical impact, such as cancer. This work describes the implementation of a preliminary in vitro methodology for the determination of potential anticancer activity in vegetal extracts, by cytotoxicity testing upon human tumor cell lines, measuring the cellular mass indirectly with the colorimetric assays of MTT (methyl tetrazolium tiazole) reduction and SRB (sulforhodamine B)staining. HT-29, MCF-7, SiHa and HEp-2 cell lines cultures were adapted, MTT concentration, cellular density and treatment period parameters for the cytotoxicity assay were selected. Cell lines sensitivity to the chemotherapeutic agent Doxorubicin HCl was determined. Colombian vegetal species extracts cytotoxicity was tested and usefulness of the assay as a tool to bioguide the search of active products was evidenced.