Desarrollo de un sistema para detección y discriminación de Cilv-c y Cilv-c2 en Colombia

Abstract

La leprosis de los cítricos es ocasionada por diversos agentes etiológicos dentro de los cuales se encuentran Citrus leprosis virus C (CiLV-C), Citrus leprosis virus nuclear type (CiLV-N), Citrus leprosis virus cytoplasmic type 2 (CiLV-C2) e Hibiscus green spot virus 2 (HGSV 2). En Colombia se confirmó la presencia de CiLV-C en cultivos de los Llanos Orientales mediante transcripción reversa-reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) en el año 2005. El reporte de 2013 de CiLV-C2 en muestras de cítricos sintomáticas colectadas en Colombia mediante la secuenciación de fragmentos pequeños de RNA (Illumina GA IIX) ha despertado interrogantes sobre la distribución de estas dos especies del género Cilevirus y si existen coinfecciones de CiLV-C y CiLV-C2 en plantaciones de cítricos en Colombia. La detección de CiLV-C en plantas hospedantes no es posible actualmente en el país mediante pruebas inmunoenzimáticas y RT-PCR con iniciadores específicos. Esta investigación desarrolla y propone un sistema de análisis molecular simultáneo mediante transcripción reversa-reacción múltiple en cadena de la polimerasa (RT-mPCR) para la detección y discriminación de CiLV-C y CiLV-C2 que permita determinar de manera específica, sensible y rápida la presencia o ausencia de coinfecciones de estas dos especies. (Texto tomado de la fuente).

Citrus leprosis disease is caused by diverse etiological agents such as Citrus leprosis virus C (CiLV-C), Citrus leprosis virus nuclear type (CiLV-N), Citrus leprosis virus cytoplasmic type 2 (CiLV-C2) and Hibiscus green spot virus 2 (HGSV 2). The presence of CiLV-C in the western plains of Colombia was confirmed in 2005 by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). A published report from 2013 of CiLV-C2 in symptomatic citrus samples in Colombia sequenced from small RNA fragments (Illumina GA IIX) had raised questions about the distribution and presence of co-infections of both CiLV-C and CiLV-C2 in citrus groves in Colombia. Detection of CiLV-C in host plants is not possible in Colombia using commercially available immunoenzymatic assays nor RT-PCR using specific primers. This study developed a molecular assay for detection analysis and discrimination of CiLV-C and CiLV-C2 by reverse transcription multiplex PCR, resulting in a fast, sensitive and specific determination of presence or absence of co-infections of these two species.