Introducción al desarrollo de una prueba diagnóstica para Prosthenorchis spp. basada en PCR

Abstract

El objetivo de este estudio fue desarrollar una prueba diagnóstica que permitiera la identificación de Prosthenorchis sp. mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se recibieron 37 parásitos, identificados morfológicamente como Prosthenorchis elegans, colectados de necropsias y cirugías de Saguinus leucopus y Cebus albifrons, para aislar y caracterizar la secuencia de citocromo oxidasa subunidad I (COI) específica para P. elegans, por medio del proceso de extracción de ADN, amplificación y secuenciación, encontrando seis haplotipos ubicados en dos haplogrupos diferentes. Se diseñaron primers específicos para la amplificación, por medio de una PCR semi-anidada, de un fragmento de P. elegans de 178 pb, siendo altamente sensibles para detectar P. elegans en muestras de heces de titi gris (S. leucopus) que habían sido negativas al coprológico. Se recomienda continuar con la estandarización de la prueba, siendo desde ya una herramienta diagnóstica y ecológica de gran utilidad para la conservación de primates del Nuevo Mundo.

Abstract. The goal of this study was to develop a diagnosis test to allow the identification of Prosthenorchis sp., through the polymerase chain reaction (PCR). 37 parasites were received, morphologically identified as Prosthenorchis elegans, collected from necropsies and surgeries from Saguinus leucopus and Cebus albifrons, for the isolation and characterization of the cytochrome oxidase subunit I (COI) specific for P. elegans, through the DNA extraction, amplification and sequencing, we found six haplotypes divided into two different haplogroups. Two specific primers were designed for the amplification through a semi nested PCR of a 178 bp fragment of P. elegans, being highly sensitive to detect P. elegans from white footed tamarin (S. leucopus) feces previously negatives at coprology. We recommend to continue the standardization of the diagnostic test, being since now a diagnosis and ecology skill of great utility for the conservation of New World Primates.