Protopectinase-se from Geotrichumklebahnii: Studies of the adsorption and pectin-solubilization capacity

Abstract

Protopectinase SE (PPase-SE) is a polygalacturonase produced by Geotrichumklebahnii with the capacity to liberate pectin through protopectin hydrolysis. The protopectin cleavage is a typical heterogeneous-catalysis reaction whose interaction between the enzyme and the protopectin substrate from lemon albedo along with the release of the pectin-reaction product were the objectives of this investigation. The interaction between PPase-SE and protopectin depended on the particle size and the structure of the substrate as well as on the nature of the buffer. The adsorption kinetics follows, for small particles, a Langmuir isotherm pattern. The reaction exhibited Michaelis-Menten kinetics, giving respective apparent-Km and Vmax values of 30.2 g/l and 57.3 g/l.h. The better results in enzyme adsorption and pectin releasing were obtained with citrate and citrate-phosphate buffers. This report constitutes the first investigation in pectin solubilization involving a model for the substrate-binding mechanism within the pectinase-protopectinase system.

Protopectinasa-SE (PPasa-SE) es una poligalacturonasa producida por Geotrichumklebahnii con capacidad de liberar pectina por hidrólisis de protopectina. La reacción de liberación de pectina responde a un sistema de catálisis heterogenea, donde la interacción enzima-protopectina y la liberación de pectina, son objetivos de esta investigación. La interacción enzima-protopectina resultó dependiente del tamaño y estructura de las partículas del sustrato, así como de la naturaleza de la solución amortiguadora. Para partículas pequeñas la cinética de adsorción siguió un comportamiento definido por la isoterma de Langmuir. La reacción respondió al modelo cinético de Michaelis-Menten, con valores de Km y Vmax de 30.2 g/L y 57.3 g/L.h. Los mejores resultados en cuanto a la adsorción de la enzima y la solubilización de pectina fueron obtenidos con una solución amortiguadora de citrato y citrato-fosfato. Este trabajo constituye un primer reporte en cuanto a la solubilización de pectina que involucra un modelo de unión al sustrato asociado en sistemas pectinasa-protopectinasa.