Desarrollo de un ítem de comparación interlaboratorio para la medición de metanol en muestras de sangre total en eventos de interés en salud pública
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Resumen
La intoxicación por metanol es un evento de interés en salud pública que exige la comprobación del brote de intoxicación por laboratorio de manera oportuna para apoyar las decisiones clínicas y prevenir secuelas graves como ceguera, daño neurológico y muerte. En Colombia, esta verificación analítica se realiza principalmente mediante el método colorimétrico del ácido cromotrópico, el cual presenta limitaciones como los son las interferencias con algunos anticoagulantes y que requiere una cantidad mínima de 5 mL de sangre, es por esto que, no se cuenta con materiales de referencia en matriz de sangre total o ensayos de aptitud que permitan asegurar la validez de los resultados. En este trabajo se desarrolló un ítem de comparación compatible con dicho método, ejecutando las diferentes etapas de producción de materiales de referencia según la ISO 33405.
Con el fin de disponer de métodos de medición adecuados para la evaluación del ítem candidato, se validaron los métodos del ácido cromotrópico (cualitativo y cuantitativo) y se desarrolló y validó un método cromatográfico HS-GC-FID. La preparación del material incluyó la obtención de las unidades de sangre a través de banco de sangre, seguido de un proceso de diálisis de sangre a través de membrana para eliminar glucosa —interferente crítico del método colorimétrico— y calcio —factor de coagulación—; posteriormente, se realizó la liofilización de la sangre, seguido de la preparación y envasado en ampollas de las soluciones de reconstitución, así como el etiquetado y embalaje del ítem en paneles, cada panel compuesto por tres niveles de concentración diferentes, cada nivel incluyó un vial de sangre liofilizada y una ampolleta con solución de reconstitución.
El material fue caracterizado por ambos métodos y evaluado conforme a la ISO 33405: Materiales de referencia – Lineamientos para la caracterización, evaluación de homogeneidad y estabilidad. La asignación de valor se realizó para cada nivel de concentración empleando combinación de valores por Dersimonian-Laird, obteniendo como valores 64.64 ± 6.58 mg/kg para el nivel 2 y 140.97 ± 7.16 mg/kg para el nivel 3; para los estudios de homogeneidad y estabilidad se empleó el método cromatográfico con tres réplicas por unidad; para la evaluación de la homogeneidad se usó un diseño de medición en una corrida, y, para la evaluación de la estabilidad se empleó un diseño isócrono con temperaturas de 4°C y -30°C, durante 28 días, usando el modelo de regresión lineal para el análisis de estos datos; para la evaluación de conmutabilidad se compararon los resultados obtenidos por los métodos colorimétrico y cromatográfico para muestras de sangre fortificada preparada a partir de sangre dializada y MRC de metanol.
Los resultados demostraron que el material de referencia preparado es homogéneo, estable en las condiciones previstas y conmutable por los métodos de medición empleados, siendo apto para su uso como herramienta de control de calidad analítica en la determinación de metanol en sangre total por el método del ácido cromotrópico.
Este proyecto se realizó entre el Instituto Nacional de Metrología y la Secretaría Distrital de Salud de Bogotá. (Texto tomado de la fuente)
Abstract
Methanol poisoning is a severe public health event that requires timely laboratory confirmation of intoxication outbreaks to support clinical decision-making and prevent outcomes such as blindness, neurological damage, and death. In Colombia, this analytical verification in mainly performed using the colorimetric chromotropic acid method, which has limitations such as interference from certain anticoagulants and requires of minimum sample volume of 5 mL. Consequently, no reference materials in whole blood matrix or proficiency testing schemes are available to ensure measurement validity. This work developed a comparison item compatible with this method, implementing the different stages of reference material production complying with ISO 33405.
In order to ensure the availability of suitable measurement methods for the evaluation of the candidate item, the chromotropic acid methods (qualitative and quantitative) were validated, and a HS-GC-FID chromatographic method was developed and validated. Material preparation included the acquisition of blood units from a blood bank, followed by a blood dialysis process using a membrane to remove glucose— a critical interferent in the
colorimetric method— and calcium— a coagulation factor. Subsequently, the blood was lyophilized, followed by the preparation and ampoule filling of reconstitution solutions, as well as the labeling and packaging of the item into panels. Each panel consisted of three concentration levels, and each level included one vial of lyophilized blood and one ampoule containing the reconstitution solution.
The material was characterized using both methods and evaluated in accordance with ISO 33405: Reference materials — Guidelines for characterization, assessment of homogeneity and stability. Value assignment was performed for each concentration level using the DerSimonian–Laird random-effects model, obtaining assigned values of 64.64 ± X Desarrollo de un ítem de comparación interlaboratorio para la medición de metanol en muestras de sangre total en eventos de interés en salud pública 6.58 mg/kg for level 2 and 140.97 ± 7.16 mg/kg for level 3. Homogeneity and stability studies were carried out using the chromatographic method with three replicates per unit. A single-run measurement design was applied for homogeneity assessment, while an isochronous design at 4 °C and −30 °C over 28 days was used for stability assessment, applying a linear regression model for data analysis. For the evaluation of commutability, results obtained by the colorimetric and chromatographic methods were compared using fortified blood samples prepared from dialyzed blood and a certified reference material (CRM) of methanol.
The results demonstrated that the prepared reference material is homogeneous, stable under the intended conditions, and commutable for the measurement methods employed, making it suitable for use as an analytical quality control tool for the determination of methanol in whole blood using the chromotropic acid method.
This project was carried out jointly by the National Institute of Metrology and the Bogota´s District Health Secretariat.
Descripción
ilustraciones a color, diagramas, fotografías, tablas