Estudio funcional de un canal de cloruro de leishmania, caracterización electrofisiológica y molecular

Abstract

Leishmania es un género de parásitos protozoarios causantes de un grupo de enfermedades de distribución mundial. Debido a la alternancia entre dos hospederos, durante su ciclo de vida, este parásito debe utilizar mecanismos que le permitan sobrevivir en dos ambientes diferentes. Durante su estadio flajelado o promastigote soporta altas osmolaridades y pH alcalino o ácido al interior del intestino de un insecto, mientras que en la fase amastigote se desarrolla en una vacuola parasitófora ácida y de osmolaridad variable. Se ha postulado como estrategia de supervivencia la actividad de una proteína H+ATPasa acoplada a un transportador de cloruro del cual aún no se ha generado suficiente conocimiento. Tras la inyección de mRNA de Leishmania amazonensis y Leishmania braziliensis en ovocitos de anfibio, nuestro grupo identificó una corriente de cloruro dependiente de voltaje generada por el parásito, lo cual llevo a la búsqueda, identificación, clonación y caracterización de posibles transportadores anionicos en Leishmania. En este trabajo se demostró la expresión génica, se clonó y se caracterizó mediante bioinformática, un intercambiador H+/Cl- de Leishmania braziliensis. Además se mostró con datos experimentales la expresión de una proteína relacionada con CLC-6 de mamífero.

Abstract: Leishmania is a genus of protozoan parasites that causes a group of diseases distributed world wide. Due to the alternation between two hosts during its life cycle, the parasite must adapt to two different environments. During its flagellated stage, promastigote, the parasites live in the alimentary tract of the insect vector, in which the environmental pH is either alkaline or acidic with high osmolarity, whereas the intracellular stage, amastigote, is exposed to a highly acidic environment with a wide osmolarity range within a lysosomal compratment known as the parasitophorus vacuole. Many studies has proposed a protein H+ATPasa as a survival mechanism coupled with an anionic transporter which molecular nature is poorly undestrood. Our research group identified a chloride current in amphibian ovocites after injection of mRNA from Leishmania amazonensis y Leishmania braziliensis. Therefore, we searched for proteins that can be anionic transporters in Leishmania. In this study we showed transcription of a H+/Cl- exchanger, which was cloned into an expression vector for functional studies. Its sequence was also analized using bioinfomatics tools. Furthermore we showed that parasites from Leishmania braziliensis express a protein related to mammalian CLC-6.