Extracción de enzimas pécticas del epicarpio del lulo (solanum quitoense) involucradas en el proceso de ablandamiento.

Abstract

Durante el periodo de poscosecha, al aplicar diferentes técnicas de conservación en fresco, el lulo (Solanum quitoense) sufre de ablandamiento que contribuye con el deterioro del fruto debido a la actividad de las enzimas pécticas que atacan la red estructural de la pared vegetal. Esta investigación se basó en la búsqueda de las mejores condiciones de extracción y medida de actividad de las enzimas Pectinesterasa, Poligalacturonasa y Pectatoliasa; Se encontró que las dos primeras enzimas pueden ser extraídas simultáneamente con buffer Fosfatos 20mM pH 7,0 + NaCl 0,06M y 60 minutos de extracción, relación 1:2 (material vegetal:buffer de extracción), a su vez, la Pectatoliasa se extrajo con buffer Fosfatos 20mM pH 7,0+ cisteína 20mM y 30 minutos de extracción, relación 1:3. Para la cuantificación de la actividad Pectinesterasa es necesario incubar 15 minutos a 42°C 2500mL de extracto enzimático crudo (EE) en buffer Fosfatos 20mM pH 7,0 + NaCl 0,15M y 1,6% de Pectina Cítrica como sustrato, con valores de Km aparente de 3,78% de PC y Vmax 17,95 mmolH+/min*mgprot. Para la cuantificación de la actividad Poligalacturonasa es necesario incubar 15 minutos a 37°C 30mL (EE) en buffer Acetatos 200mM pH 4,5+NaCl 0,25M y 1,0% de APG como sustrato, con valores de Km aparente 0,141% de APG y Vmax 28,46nKat/s*mgprot. Para la cuantificación de la actividad Pectatoliasa es necesario incubar 2 minutos a 17°C 100mL (EE) en buffer TRIS:HCl 50Mm pH 8,5+CaCl2 4mM y 0,1% de ÁPG como sustrato, con valores de Km aparente 0,0865% de APG y Vmax 82,75mg/s*mgprot.

The main problem of post-harvest deterioration of lulo (Solanum quitoense Lam) is the softening is the main problem of post-harvest deteriorarion of Lulo, that is generated mainly by the activity of pectic enzymes, which attack the structural network of the cell wall. This research was based on finding the best conditions structural cell wall network for extraction and measurement of enzyme activity pectinesterase (PE), polygalacturonase (PG) and pectato liasa (PL); tools needed to study the further role of these enzymes in the deterioration of pectatelyase fruit softening, due to various metabolic changes. It was found that the first two enzymes can be extracted simultaneously with 20 mM phosphate buffer pH 7.0, 0.06 M NaCl and 60 minutes of extraction, ratio 1:2 (plant material: extraction buffer), pectatelyase extracted with 20 mM phosphate buffer pH 7.0, 20 mM cysteine and 30 minutes of extraction, ratio 1:3. For quantification of pectinesterase activity is necessary to incubate 15 minutes at 42 ° C, 2500 µL of crude enzyme extract (EE) in 20 mM phosphate buffer pH 7.0, to 0.15 M NaCl and 1.6% citrus pectin as (CP) substrate with apparent Km values of 3.78% CP and Vmax 17.95 mol H+/min * mg prot. For the quantification of pectinesterase activity is necessary to incubate 15 minutes to 42 °C 2500 µL of crude enzyme extract (EE) in 20 mM phosphate buffer pH 7.0, 0.15 M NaCl and 1.6% citrus pectin as substrate with apparent Km values of 3.78% CP and 17.95 µ Vmax mol H+/min*mg prot. For the quantification of polygalacturonase activity is necessary to incubate 15 minutes to 37 °C 30 µL (EE) in 200 mM Acetate buffer pH 4.5, 0.25 M NaCl and 1.0% of APG as substrate, with apparent Km values 0.141% of APG and Vmax 28.46 nKat/s*mg prot. For the quantification of the pectatelyase activity is necessary to incubate 2 minutes to 17 °C, 100 µL (EE) in buffer TRIS: HCl pH 8.5, 50 mM 4 mM CaCl2 and 0.1% PGA as substrate, with apparent Km values 0.0865% of APG and Vmax 82.75 µg/s*mg prot.