Caracterización fisicoquímica y evaluación de la actividad antioxidante de propóleos de Antioquia

Abstract

El propóleos es un producto de la colmena ampliamente utilizado en la medicina tradicional por sus reconocidas propiedades terapéuticas. En Antioquia, el propóleos es comercializado en tiendas naturistas para controlar algunas afecciones respiratorias, tales como bronquitis, tos e irritación de la garganta, en niños y adultos. Sin embargo, este producto no cuenta actualmente con estudios que respalden su uso, y garanticen su calidad, inocuidad y eficacia. Para efectuar una apreciación objetiva de la calidad del propóleos, y por lo tanto, establecer el valor real del mismo, es necesario realizar su evaluación, mediante determinaciones analíticas. Para tal fin, en el presente trabajo se estudiaron muestras de propóleos de cinco regiones de Antioquia, para establecer los perfiles químicos y la actividad antioxidante. Las muestras se sometieron a extracción con etanol; los extractos resultantes se analizaron mediante Cromatografía de Capa Fina (CCF), Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (CLAE), Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas (CG-EM) y Resonancia Magnética Nuclear de 1H y 13C (RMN), estableciéndose diferencias en la composición de los extractos. El análisis por CG de las muestras derivatizadas (sililadas) y la comparación de los espectros de masas con los de la base de datos Nist 02, permitió la detección de carbohidratos, ácidos grasos y sus ésteres, esteroides, diterpenos, triterpenos, etc., en los propóleos de Antioquia. Adicionalmente, se evaluaron algunos parámetros químicos mediante métodos espectrofotométricos y se analizó la actividad antioxidante in vitro. En los primeros, se determinó el contenido de fenoles totales, flavonoides totales, y flavanonas y dihidroflavonoles, en cada una de las muestras. Mientras que el estudio de la actividad antioxidante de cada extracto etanólico se llevó a cabo mediante los métodos de DPPH, ABTS y FRAP. Los resultados mostraron que los extractos con mayor actividad antioxidante, son a su vez los que presentan mayor contenido de compuestos fenólicos. Finalmente, con el objeto de obtener algunos estándares químicos, las muestras se fraccionaron utilizando técnicas cromatográficas de adsorción y permeación. Los fraccionamientos condujeron al aislamiento de algunos compuestos mayoritarios presentes en los própoleos, tales como los diterpenos tipo labdano agatadiol, ácido isocuprésico, y torulosol, el triterpeno pentacíclico lupeol, y algunos compuestos de naturaleza fenólica (ácidos aromáticos y flavonoides). Las estructuras de los compuestos se determinaron mediante técnicas espectroscópicas modernas, y datos consignados en la bibliografía y en la base de datos Nist 02. / Abstract. Propolis is a hive product widely used in traditional medicine for its therapeutic properties. In Antioquia (Colombia), propolis is sold to control some diseases such as bronchitis, cough and sore throat in children and adults. However, there are not studies supporting their use and ensure their quality, safety and efficacy. The present paper deal with the study of propolis samples from five regions of Antioquia, to establish the chemical profile and antioxidant activities of each one. The samples were extracted with ethanol, the resulting extracts were analyzed by Thin Layer Chromatography (TLC), High Performance Liquid Chromatography (HPLC), Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS) and Nuclear Magnetic Resonance 1H and 13C (NMR), to establish the chemical profile. This study showed differences in the composition of the ethanolic extracts. The analysis of derivatized samples by GC and the comparison with their mass spectra from of database Nist database 02, allowed the detection of carbohydrates, fatty acids and their ester; as well as, steroids, diterpenes, triterpenes, etc. Additionally, some chemical parameters were evaluated by spectrophotometric methods such as the total phenolic substances, total flavonoids, and flavanone and dihydroflavonol contents. The in vitro antioxidant activity was analyzed by DPPH, FRAP and ABTS methods. In addition, the results showed that the extracts with higher antioxidant activity, are also those with higher content phenolic compounds. Furthermore, the differents ethanolic extracts were fractionated using adsorption and permeation chromatographic techniques. The most abundant compounds were diterpenes type labdane, agatadiol, isocruprecic acid and torusol, as well lupeol a pentacyclic triterpene, and some type of phenolic compounds (flavonoids and aromatic acids). The structures of the compounds were determined using modern spectroscopic techniques, and literature data and the database Nist 02.