Aislamiento y purificación de prolactina humana. ii. purificación y caracterización parcial

Abstract

En este trabajo se describe un sistema cromatográfico en dos etapas que permite la purificación de prolactina humana (hPRL), a partir del residuo obtenido después de la extracción con solución salina de hipófisis conservadas congeladas. La PRL se solubilizó en acetato de amonio 50 mM, pH 10 y se purificó por medio de cromatografía de interacción hidrofóbica, sobre el soporte Fenil-Sepharosa en presencia de un gradiente lineal de acetonltrílo (0-40%). La fracción con actividad de PRL se aplicó a una columna de DEAE-Celulosa en presencia de acetonítrilo (20%) y se eluyó con un gradiente salino. El rendimiento del proceso fue de 7.75 mg PRL por 100 glándulEis, lo que corresponde a una recuperación global de 33%. Por radioinmunoanálisis especifico (RÍA) se encontró una potencia de 10.6 Ul/mg de proteina en la preparación final. El análisis electroforético mostró dos componentes principales de pesos 27.000 Dattons, que corresponde al monómero principal y 64.000 Daltons, que sugiere una forma agregada o glicosilada, cuya existencia ha sido reportada en el suero. La presencia de isohormonas también fue detectada por el análisis de electroenfoque, encontrándose un valor de punto isoeléctrico (PI) de 5.7 para la especie principal. Este comportamiento también se observó con la preparación internacional de referencia usada en este trabajo.