Estandarización y aplicación de la técnica de pcr – anidado para la detección de mycoplasma hyopneumoniae

Abstract

El Mycoplasma hyopneumoniae es el agente causal de la Neumonía enzoótica porcina, una de las enfermedades más importantes en la industria porcina. En la actualidad, el proceso de diagnóstico ante-mortem es una de las principales diicultades, dadas la poca sensibilidad y especiicidad de las técnicas que se utilizan. El propósito de esta investigación fue estandarizar la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) anidada para la detección de Mycoplasma hyopneumoniae, utilizando diferentes métodos de extracción del ADN, tanto comerciales como convencionales. Para determinar la sensibilidad de la técnica se realizaron diluciones seriadas al cultivo de Mycoplasma hyopneumoniae, cepa J, mantenida en medio Friis. También se evaluaron algunas modiicaciones hechas a la mezcla de la reacción de PCR tradicional reportadas en la literatura y, una vez ajustada, la técnica fue aplicada en muestras clínicas como hisopados nasales y lavados traqueobronquiales. Los mejores resultados fueron obtenidos cuando el ADN se extrajo de la bacteria por calor y se trató con proteinasa K para luego ser utilizado en una reacción de PCR - anidado que no contenía estabilizadores de la Taq-polimerasa, como el glicerol o la seroalbúmina bovina. Bajo estas condiciones, se logró detectar M. hyopneumoniae hasta la dilución de 10-5 de un cultivo puro de la cepa J de referencia y también a partir de algunas muestras clínicas.