Actividad funcional de anticuerpos inducidos por péptidos-miméticos derivados del antígeno msp-2 del plasmodium, como potenciales agentes inmunoterapéuticos en malaria causada por plasmodium yoelii y plasmodium berghei en ratonres balb/c

Abstract

Teniendo en cuenta el alto grado de conservación genética de los residuos críticos de la estructura primaria del péptido 4044 ( 21 KNESKYSNTFINNAYNMSIR 40 ) identificado como crucial en el antígeno MSP-2 para que el Plasmodium falci- parum pueda unirse con alta capacidad específica a glóbulos rojos y causar malaria, se diseñaron y sintetizaron dos secuencias en formas monomérica y polimérica de péptido-miméticos denominados pseudopéptidos amida reducida en las cuales se sustituyó un enlace peptídico normal por su isóstero ψ[CH 2 -NH] entre los residuos fenilalanina-isoleucina y entre los residuos isoleucina-asparagina, para dar lugar a los pseudopéptidos codificados ψ-128 forma monomérica (ψ-129 forma polimérica) y ψ-130 forma monomérica (ψ-131 forma polimérica). Con estos péptido-miméticos se generaron anticuerpos monoclonales de isotipo IgM. Mediante experimentos controlados de inmunización in vitro se indujo el cambio isotipo de los clones reac- tivos a las subclases IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3. Estas inmunoglobulinas se ensa- yaron por su actividad funcional antimalárica in vivo mostrando una alta eficacia en el control de la infección por malaria al ser administradas por transferencia pasiva. El efecto neutralizador del desarrollo biológico del patógeno por parte de estos anti- cuerpos inducidos de manera sitio-dirigida los hacen potencialmente útiles, como una potencial herramienta para el control de la infección por malaria.

Bearing in mind the high degree of genetical conservation of critical binding residues from the primary structure of the peptide 4044 ( 21 KNESKYSNT- FINNAYNMSIR 40 ), which was previously identified as being crucial for the MSP-2 antigen to lead Plasmodium falciparum to bind red blood cells with high specific capacity, and so causing malaria, two peptido-mimetics so-named reduced amide pseudopeptides, in which a nature-made amide bond was replaced with a ψ[CH 2 -NH] methylene amide isoster bond, one between the Phe-Ile aminoacid pair and the second between Ile-Asn, were designed and synthesized in a site-di- rected manner as monomer and polymer forms, and were coded as ψ-128 for the monomer (ψ-129 polymer) and ψ-130 for the monomer (ψ-131 for polymer) respectively. These peptido-mimetics were used to produce monoclonal antibodies which displayed in both cases IgM isotype. By controlled in vitro immunization experiments their parent reactive hybridomas were induced to a Ig isotype-switching to IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3 sub-classes. These immunoglobulins were tested for their in vivo functional activity against malaria, showing a high efficacy property for controlling the malaria infection when passively transferred into BALB/c mice. The neutralizing effect of these site-directed designed antibodies on the Plasmodium biological development, make them a potential tool for the control of malaria.