Aislamiento y cultivo de fibroblastos endoneurales

Abstract

Los fibroblastos son tejido-específicos, normalmente degradan y sintetizan constantemente los diferentes elementos de la matriz extracelular (MEC), pero también remodelan los tejidos en reparación. Los fibroblastos dérmicos son los más estudiados in vitro e in vivo y se emplean para regenerar la MEC dérmica que sirve de apoyo para la regeneración de la epidermis. La confluencia de los fibroblastos dérmicos o periodontales se hace entre los ocho y diez días de cultivo. En la regeneración de nervios periféricos lesionados, las células de Schwann secretan factores de crecimiento neurotróficos y neurotrópicos y algunos elementos de la MEC necesarios para la regeneración, motivo por el cual son las más estudiadas y empleadas. Hasta el momento los fibroblastos endoneurales (FE) no se han tenido en cuenta como elemento importante en la regeneración nerviosa porque en ocasiones forman fibromas que impiden la regeneración del nervio. Pero hay indicios, que pueden jugar un papel importante adicional al remodelar la MEC, secretando metaloproteínas que además convierten el preNGF (Nerve Growth Factor) secretado por las células de Schwann en NGF activo que promueve la regeneración de las neuritas. El objetivo de este trabajo fue aislar y lograr el cultivo de FE purificados de nervios ciáticos de ratón adulto. Se desarrollaron diferentes métodos de disección y digestión para obtener los cultivos primarios de FE puros y estudiarlos como se ha hecho con células de Schwann. Se logró aislar selectivamente FE, alcanzado la confluencia entre el cuarto y el quinto día de cultivo primario en monocapa. La obtención de una población de FE permitirá estudios en cultivos tridimensionales y en prótesis, para desarrollar y determinar nuevas alternativas en la regeneración de nervios periféricos.

Fibroblasts which are tissue-specific, constantly degrade and synthesize the different elements of the extra-cellular matrix (ECM), while at the same time remodel tissues that are being repaired. Dermal fibroblasts are well studied both in vitro and in vivo, and are used to regenerate dermal EMC which in turn supports the regeneration of the epidermis. Confluence of dermal or periodontal fibroblasts takes place between 8 and 10 days of culture. In the process of regeneration of damaged peripheral nerves, Schwann's cells secrete neurotrophic and neurotropic growth factors and some of the EMC elements needed for regeneration to take place, which makes them the most studied and used cells in culture. So far, endoneural fibroblasts (EF) have not been considered as important elements in nerve regeneration, mainly because they may occasionally form fibromes that hinder regeneration. But there is evidence that they may play a role in the remodeling of the EMC, through the secretion of metalloproteins that modify the pre-Nerve Growth Factor (preNGF) secreted by Schwann's cells into active NGF, which promotes neurites regeneration. The aim of this study was is to isolate EF from sciatic nerves taken from mature rats, and to obtain them in purified culture. A number of methods of dissection and digestion were developed to obtain primary pure EF cultures as well as to study them in the way Schwann's cells have been studied. Selective isolation of EF was accomplished, reaching confluence between the fourth and the fifth day in monolayer primary culture. Producing a population of EF will make it possible to carry out studies in tridimensional culture and in prosthesis in order to define and develop new alternatives for the regeneration of peripheral nerves.