Obtención de plasma sanguíneo y de médula ósea para análisis proteomico diferencial entre niños sanos y con diagnóstico de Leucemia Linfoide Aguda

Abstract

Actualmente el diagnóstico de la leucemia linfoide aguda (LLA) se realiza mediante la exploración citogenética y la definición del inmunofenotipo en muestras de médula ósea obtenidas por punción lumbar de los pacientes en los que se sospecha desarrollo de la enfermedad. No obstante, la comunidad científica ha planteado la necesidad de buscar moléculas marcadores de estadios de enfermedad en fluidos biológicos de más fácil acceso para evitar procedimientos invasivos dolorosos para los pacientes. En este sentido el plasma sanguíneo se considera una potencial fuente de biomarcadores de origen proteico provenientes de todos los tejidos del cuerpo; especialmente útil en enfermedades de tipo sistémico como leucemia. Este trabajo utilizó una estrategia basada en electroforesis bidimensional como herramienta de alta resolución para la separación de proteínas del plasma sanguíneo previa reducción de la complejidad de la muestra con cromatografía de afinidad para la remoción específica de las dos proteínas más abundantes del plasma: albúmina e inmunoglobulina G. Mediante programas de análisis de imágenes detectaron “spots” o manchas de proteína diferencialmente expresadas entre muestras de pacientes diagnosticados con LLA tipo B y muestras de individuos sanos, las cuales se analizaron mediante espectrometría de masas y análisis bioinformatico para su identificación. Se logró identificar varias proteínas con expresión diferencial, entre las cuales se encuentran: La proteína de unión a vitamina D, Apolipoproteina E, Apolipoproteina A-1 y la Glicoproteína acida 1-alfa. Estos resultados preliminares sirven de base para la búsqueda de potenciales biomarcadores sanguíneos para el diagnóstico de esta enfermedad.

Abstract. Currently, the diagnosis of acute lymphoblastic leukemia (ALL) is performed by cytogenetic examination and definition of the immunophenotype in bone marrow which is obtained by lumbar puncture of patients in whom the development of the disease is suspected. However, the scientific community has raised the need to find specific biomarkers of the disease, mainly in biological fluids of easier access to avoid invasive and painful procedures for patients. In this regard the blood plasma is considered a potential source of protein biomarkers from all body tissues; this is especially useful in acute systemic diseases such as leukemia. This work proposed a strategy based on two-dimensional electrophoresis for the separation of plasma proteins previous reduction of sample complexity by affinity chromatography that causes specific removal of the two most abundant proteins in plasma: albumin and immunoglobulin G. Image analysis allowed to identify differentially-expressed protein spots between samples of patients diagnosed with ALL type B and samples from healthy individuals. Those spots were analyzed by mass spectrometry and bioinformatic analysis for protein identification. This methodology achieved to identify several proteins with differential expression as Vitamin D bindig protein, apolipoprotein E, apolipoprotein A-1 and alpha 1-acid glycoprotein. These preliminary results can be the basis for finding potential blood biomarkers for the diagnosis of this disease.