Estudio de la expresión de proteínas en el modelo Leishmania-Macrófago con énfasis en canales iónicos

Abstract

La caracterización de las propiedades eléctricas de las membranas implicadas en la interacción Leishmania-Macrófago, ha permitido describir la presencia y el cambio de ciertas corrientes iónicas producto de la función de ciertas proteínas. Los cambios de las corrientes iónicas de potasio en la membrana del macrófago como consecuencia de la infección, sugieren alteración en el patrón de expresión de proteínas entre macrófagos no infectados e infectados. Estos resultados nos llevaron a iniciar el estudio de la expresión de las proteínas responsables de las corrientes iónicas registradas en el modelo Leishmania-macrófago y los cambios en el proteoma después de la infección. En este estudio, se describen las mejores condiciones experimentales para la obtención de extractos de proteína total y extractos enriquecidos con proteínas de membrana, y se logra la detección de las proteínas Kir2.1, Kv1.5 y CLC3 en macrófagos, Kir2.1 en fagosomas y CLC en parásitos de Leishmania por western blot. La disminución en la expresión de Kir2.1 a medida que la infección progresa apoya la interpretación que la hiperpolarización reportada puede ser secundaria al aumento de las corrientes de salida de potasio voltaje dependientes. El análisis comparativo mediante electroforesis bidimensional (2DE) de los proteomas de macrófagos no infectados e infectados, muestra diferencias estadísticamente significativas en 58% de los spots de proteína detectados. A futuro su identificación por espectrometría de masas permitirá conocer las proteínas involucradas.

Abstract. The electrophysiological characterization of the membranes involved in the Leishmaniamacrophage interaction, allowed describes the presence and exchange of certain ion currents set the function of certain proteins. The changes in the potassium ionic currents due to infection implicate alterations in the expression pattern of protein between non infected and infected cells. Thus, the expression of the proteins responsible for these ion currents in the Leishmania-macrophage model and changes in the proteome after infection was studied. The best conditions to obtain total and membrane extracts are shown, as well as detection by western blot of the Kir2.1, Kv1.5 and CLC3 in macrophage, Kir2.1 in phagosomes and CLC in Leishmania parasites. The expression of Kir2.1 decreases as infection progresses supporting the idea that the hiperpolarization previously reported may be attributed to increased outward voltage dependent potassium currents. Furthermore, the comparative analysis by two-dimensional electrophoresis (2DE) of the proteomes of non-infected and infected macrophages, shown statistically significant differences in 58% of the protein spots detected, whose identification by mass spectrometry will reveal the proteins involved.