Identificación de moléculas candidatas a proteínas efectoras de Microcyclus ulei presentes en la interacción con Hevea brasiliensis

Abstract

El mal suramericano de la hoja del caucho, es una de las enfermedades más degenerativas del cultivo de Hevea spp, causada por la infección del hongo Microcyclus ulei provoca caída prematura de las hojas y limita la actividad fotosintética, causando pérdidas millonarias en los cultivos heveicolas latinoamericanos. Actualmente no se tiene conocimiento de los factores de patogenicidad de M. ulei que permiten la colonización de H. brasiliensis. El objetivo de este trabajo fue identificar moléculas candidatas a proteínas efectoras extracelulares del hongo M. ulei en interacción con H. brasiliensis 9 días posinfección, mediante la caracterización del proteoma del fluido apoplástico de H. brasiliensis y la búsqueda de genes codificantes de proteínas efectoras que presentan homólogia en su secuencia a otras proteínas efectoras descritas en hongos fitopatógenos de la clase de los Dothideomycetes. Se estandarizó la técnica de infiltración-centrifugación para la extracción del fluido apoplástico de foliolos de H. brasiliensis con síntomas de la enfermedad, el cual fue visualizado y analizado mediante 2D-PAGE. Se evaluó en el DNA del hongo y en el cDNA obtenido a partir de los foliolos infectados la presencia de los genes Ecp6 y Ecp7. Como resultado del análisis proteico, se observó en el fluido de la interacción la presencia de 8 spots de bajo peso molecular (9,2 a 9,7 kDa), que se constituyen en candidatos a posibles efectores o proteínas de respuesta de la planta, adicionalmente como producto de la amplificación del gen Ecp7 se obtuvo un amplímero en el DNA del hongo y el cDNA de la interacción, el cual al ser secuenciado y comparado contra la base de datos del GeneBank no presentó semejanza con ninguna secuencia publicada, resultado que indica que el amplímero podría corresponder a un gen ortólogo de Ecp7 hasta ahora no descrito en M. ulei.

Abstract: The South American disease of the rubber leaf or SALB, is one of the most degenerative diseases of the crop of Hevea spp , caused by the infection of the Microcyclus ulei . Causes premature fall of the leaves and limits the photosynthetic activity, causing millionaire losses in Latin American heveicola crops. At present, the pathogenicity factors of M. ulei that allow the col onization of H. brasiliensis are not known. The objective of this work was to identify candidate molecules of extracellular effector proteins of the M. ulei fungus in interaction with H. brasiliensis , 9 days after infection, by characterizing the proteome of the apoplastic fluid of H. brasiliensis and the search for homologous proteins to effectors described in phytopathogenic fungi of Dothideomycetes class . The technique of infiltration - centrifugation was standardized for the extraction of apoplastic fluid from H. brasiliensis leaf with symptoms of SALB, it was visualized and analyzed by 2D - PAGE. The presence of the selected genes was evaluated from cDNA obtained from infected leaflets. As a result of the protein analysis, the presence of 8 spots of low mol ecular weight (9.2 to 9.7 kDa), which are candidates for potential effectors or response proteins of the plant. Additionally an amplified was obtained in the DNA of the fungus and the cDNA of the interaction, such that it did not present homology when sequ encing , which could correspond with an orthologous gene of the gene Ecp7 not described yet in M. ulei.