Detección molecular de Anaplasma sp en ovinos del municipio de Montelíbano departamento de Córdoba-Colombia

Abstract

La anaplasmosis es una enfermedad de gran importancia en las regiones tropicales y subtropicales al rededor del mundo, que genera significativas pérdidas económicas en la producción ganadera mundial. Es una infección causada por bacterias del género Anaplasma y afecta una amplia variedad de hospederos, incluidos bovinos, ovinos, caninos y humanos. En Colombia, son escasos los reportes sobre la presencia de Anaplasma en pequeños rumiantes, las técnicas de diagnóstico utilizadas para la identificación incluyen historia, signos clínicos, microscopía y solo un estudio de tipo molecular, llevado a cabo en caprinos del departamento de Santander, sin embargo, estos reportes no han permitido identificar las especies de Anaplasma presentes en la población ovina del país. La detección de Anaplasma sp., se realizó utilizando muestras de sangre tomadas de ovinos clínicamente sanos en el municipio de Montelíbano, Córdoba, se evaluaron frotis sanguíneos mediante microscopia directa y se hicieron análisis moleculares inicialmente mediante PCR para el gen msp4 de Anaplasma spp, posteriormente los animales positivos fueron evaluados para detectar Anaplasma marginale y Anaplasma ovis empleando también PCR para el gen msp4. Los productos se purificaron y se secuenciaron para caracterizar las especies de Anaplasma presentes y las secuencias obtenidas fueron empleadas en la construcción de un árbol filogenético para determinar la diversidad genética de las especies encontradas. Se encontró que el 9.58% (16/167) de los individuos fueron positivos al examen microscópico directo mientras que el 35,33% (59/167), fueron inicialmente positivos a Anaplasma spp y posteriormente tipificados en su totalidad como Anaplasma marginale. El análisis BLASTn de las secuencias de los aislamientos mostró que no existe una gran variabilidad entre ellos, sin embargo, el estudio filogenético permitió determinar la presencia de dos genotipos dentro de la población, que se agrupaban en clados junto a aislamientos de Norte y Latino América respectivamente.

Abstract: Anaplasmosis is a disease of great importance in tropical and subtropical regions around the world, which generates significant economic losses in world livestock production. It is an infection caused by bacteria of the genus Anaplasmaand affects a wide variety of hosts, including cattle, sheep, dogs and humans. In Colombia, there are few reports on the presence of Anaplasmain small ruminants, the diagnostic techniques used for identification include history, clinical signs, microscopy and only one molecular study, carried out in goats of the Department of Santander, however, thesereports have not allowed to identify the Anaplasmaspecies present in the country's sheep population.The detection of Anaplasma sp.,was carried out using blood samples takenfrom clinically healthy sheep in the municipality of Montelíbano, Córdoba, blood smears were evaluated by direct microscopy and molecular analyzes were initially made by PCR for the msp4gene of Anaplasma spp, subsequently the positive animals were evaluated to detect Anaplasma marginale andAnaplasma ovisalso using PCR for the msp4gene. The products were purified and sequenced to characterize the Anaplasma species present and the sequences obtained were used in the construction of a phylogenetic tree todetermine the genetic diversity of the species found It was found that 9.58% (16/167) of the individuals were positive to the direct microscopic examination while 35.33% (59/167) were initially positive to Anaplasma sppand later typified in its entirety as Anaplasma marginale. The BLASTn analysis of the sequences of the isolates showed that there is no great variability among them, however, the phylogenetic study allowed to determine the presence of two genotypes within the population, which were grouped in clades with isolates from North and Latin America respectively.