Efecto neuroprotector de la proteína C activada ante la apoptosis inducida por C2-ceramida en células CAD: activación de la vía PI3K-AKT

Abstract

La enfermedad de parkinson está caracterizada por apoptosis de neuronas dopaminérgicas, la ceramida esta implicada en este evento apoptótico. La Proteína C Activada (PCA) presenta un efecto antiapoptótico en células neuronales primarias murinas y disminuye la perdida neuronal en conejos con daño isquémico induciendo un aumento en la fosforilación de la proteína de supervivencia AKT. Esta investigación tiene el propósito de evaluar el efecto antiapoptótico de PCA en células neuronales dopaminérgicas CAD ante la exposición a C2-ceramida y la mediación de la vía PI3K-AKT en este proceso. Las células fueron diferenciadas por cuatro días en ausencia de suero fetal bovino, se aplicó PCA (100 nM, 12 horas) y luego C2-ceramida (25 uM, 6 horas) se determino la viabilidad mediante el ensayo de MTT, la apoptosis mediante el ensayo de la actividad enzimática de la Caspasa-3 y la condensación del ADN por tinción de Hoechst, la detección de la fosforilación de AKT se realizó mediante Western blot empleando quimioluminiscencia. Los resultados demuestran que el pretratamiento con PCA aumenta la viabilidad, disminuye la actividad de caspasa-3 y aumenta la fosforilación de AKT en células tratadas con C2-ceramida, sugiriendo disminución de apoptosis mediante activación de la vía PI3K-AKT. / Abstract. Parkinson disease is characterized by apoptosis in dopaminergic neurons. Ceramide is involved in this apoptotic event. Protein C (PCA) prevents apoptosis in primary murine neuronal cells and decreases neuronal loss in rabbits with ischemic damage by inducing an increase in phosphorylation of AKT, an survival protein. This research aims to assess the antiapoptotic effect of PCA in dopaminegic neuronal cells CAD against exposure to C2-ceramide and implication of PCA in PI3K-AKT pathway. Cells were differentiated by four days without Phoetal Bovine Serum; they were treated with PCA (100 nM, 12 hours) and then C2-ceramide (25 uM, 6 hours); Viability was determinated by MTT; Apoptosis was tested by Caspase-3 activity assay and DNA condensation by Hoechst stain. Phosphorylated AKT was detected by Western blot. The results demonstrated pre-treatment with PCA increases the viability, reduces the activity of Caspase-3 and increases the phosphorylation of AKT cells treated with C2-ceramida, suggesting an decrease in apoptosis through activation of PI3K-AKT pathway.