Producción de la proteína de choque térmico hsc70 recombinante en escherichia coli bl21 (de3) para generar anticuerpos policlonales

Abstract

Antecedentes. Los organismos vivos respondenal estrés aumentando la síntesis de proteínas.El estrés por choque térmico ha sido el másestudiado y las proteínas que se inducen, se handenominado genéricamente como proteínas dechoque térmico.Objetivo. En este trabajo se establecieron lascondiciones óptimas de producción de la proteínaHSC70, expresada en E.coli BL21 (DE3) yde los anticuerpos policlonales que permitan identificarla.Material y métodos. Mediante varios ensayosse establecieron las concentraciones óptimas delagente inductor isopropil-b-D-thiogalactopiranosido(PTG), del inóculo bacteriano, de empleo de losplásmidos de expresión pET-3a y pET-28a (+); yel método más eficiente para la recuperación delas formas soluble o insoluble de la proteína y deanticuerpos policlonales que la identifiquen.Resultados. Encontramos que el inóculo decinco colonias con IPTG (2mM) en tubos concinco mililitros de medio modificado e incubadaspor 24 horas a 37°C con agitación constante(200 r.p.m) y tratamiento de sonicación, produceel mejor rendimiento de HSC70. La calidadde la proteína inducida se estableció mediante“Western blotting”.Conclusión. La proteína recombinante así obtenidapermitió, generar anticuerpos policlonalesque a su vez permiten detectar la proteína HSC70 natural en la membranacitoplasmática de diferentes células porinmunofluorescencia, en ELISA, en WesternBlot y en pruebas de bloqueo de infección derotavirus.