Aproximación a la regulación de algunas enzimas involucradas en el metabolismo del NAD+ en Giardia duodenalis
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Otro
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EspañolFecha de publicación
2019-04-22Resumen
Giardia duodenalis is a parasite that causes giardiasis. This affects humans and mammals, and it is currently considerated a public health problem. G. duodenalis is a high relevance organism due to its basal evolution and simple metabolism, it is an excellent model to study metabolic pathways as well as its approximation in higher eukaryotic organisms. NAD+ is a fundamental molecule for cell viability because is involved in different biological processes, such as energy production, cell signalling, DNA reparation and gene expression regulation. Because of the importance of NAD+, our research group is focused on the study of existing enzymes in its metabolism. In G. duodenalis has been identified: NAD kinase (GINADK), nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase (GINMNAT) and the sirtuins GdSir 2.1 y GdSir 2.2. However, nothing is known about its regulation. This study is emphasized on the regulation of the first two enzymes. The in-silico analysis of the regulation of both enzymes in a transcriptional and post-translational level was made. Regarding the first level, the promoter regions of both genes were studied. Afterwards, a candidate transcription factor (Myb2), for the regulation of gInadk was identified. About the second level, the regulation of GINADK by covalent modification and, protein-protein interaction with Ca2+/calmodulin (CaM) was evaluated. Later on, we applied the experimental approach. It was found that GINADK expression is modulated in stress response. Additionally, we produced three tools to evaluate the interaction between Myb2 and the gInadk promoter. Finally, in a postranslational level, it was discovered that GINADK is probably phosphorylated by calmodulin-dependent protein kinases. Considering the previous findings, it was concluded that there are different mechanisms for the regulation of this protein in both levels.Resumen
Giardia duodenalis es el agente causal de la enfermedad gastrointestinal giardiasis, la cual afecta tanto a humanos como mamíferos y es considerado un problema de salud pública. Este organismo es de gran relevancia biológica por su evolución basal y metabolismo simple, que por sus características se convierte en un excelente modelo para el estudio de vías metabólicas y su aproximación en eucariotas superiores. El NAD+ es una molécula fundamental para la viabilidad celular, participando en diferentes procesos biológicos como la producción de energía, la señalización celular, la reparación del DNA y la regulación de la expresión génica. Dada la importancia del NAD+, nuestro grupo de investigación se ha centrado en el estudio de las enzimas presentes en su metabolismo. Para G. duodenalis se han identificado: la NAD quinasa (GINADK), la nicotinamida/ nicotinato mononucleótido adenilil transferasa (GINMNAT) y 2 sirtuinas (GdSir 2.1 y GdSir 2.2), sin embargo, nada se conoce de la regulación de estas. Este trabajo se enfocó en el estudio de la regulación de las dos primeras enzimas. Se realizó un análisis in silico de la regulación de ambas proteínas a nivel transcripcional y postraduccional. Para el primer nivel, se estudiaron los promotores de ambos genes, encontrando elementos propios de G. duodenalis. Posteriormente, se seleccionó un factor de transcripción candidato (Myb2) para la regulación de gInadk. En el segundo nivel, se evaluó la posible regulación de GINADK por modificación covalente e interacción proteína-proteína con Ca2+/calmodulina (CaM). Después de ello, se realizó la aproximación experimental, en la que se encontró que la expresión de GINADK es modulada en respuesta a estrés. Adicionalmente, se generaron tres herramientas para el estudio de la interacción de Myb2 con el promotor de gInadk, las cuales podrán ser de gran utilidad en el estudio de este mecanismo en análisis posteriores. Finalmente, a nivel postraduccional se reconoció que esta misma proteína es fosforilada, probablemente, por quinasas dependientes de Ca2+/calmodulina. Paralelo, se realizó una aproximación experimental su posible interacción con GICaM. Con lo anterior, se pudo concluir que existen diferentes mecanismos de regulación para GINADK en ambos niveles.Palabras clave
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