Estudio de la acción insecticida de constituyentes químicos presentes en aceites esenciales y su efecto sobre enzimas desintoxicantes y de función motora para Sitophilus zeamais

Abstract

Sitophilus zeamais es una plaga cosmopolita que ocasiona pérdidas del 15 al 50% en granos almacenados, productos indispensables para la seguridad alimentaria. El método más utilizado para su control son los insecticidas sintéticos, que tienen desventajas como elevado costo, alta toxicidad y la generación de resistencia. Por lo tanto, se hace necesario el desarrollo de agentes fitosanitarios que permitan el control eficiente y seguro de esta plaga. En este aspecto, las plantas son una fuente prometedora de metabolitos secundarios bioactivos, con una amplia diversidad estructural, que pueden ser utilizados como bioinsecticidas. Una manera de obtener este tipo de sustancias es mediante la extracción de aceites esenciales (AEs), que se caracterizan por ser mezclas lipofílicas de compuestos volátiles, lo cual les permiten afectar de diferentes modos las funciones metabólicas, fisiológicas y el comportamiento de los insectos. En esta heurística de agentes fitosanitarios, nuestro equipo de investigación durante los últimos 14 años ha evaluado más de 100 AEs contra S. zeamais, provenientes de plantas nativas e introducidas en Colombia, contribuyendo a la caracterización química de especies vegetales. Estudios que permitieron determinar 26 aceites con acción repelente e insecticida por contacto y/o fumigante frente a S. zeamais. Si bien se avanzado mucho en la investigación de la actividad insecticida de AEs con resultados prometedores frente a S. zeamais, no se ha hecho gran énfasis en establecer cuáles de sus constituyentes son los responsables de la bioactividad frente al insecto, las posibles interacciones sinérgicas, aditivas y/o antagónicas entre sus componentes, ni tampoco los posibles mecanismos de acción frente a enzimas involucradas en procesos de neurotransmisión y desintoxicación celular. En este sentido, la presente investigación determinó la acción insecticida de constituyentes químicos (CQs) de AEs bioactivos, seleccionando los compuestos con mayor efecto tóxico fumigante y/o por contacto sobre S. zeamais. Posteriormente, se llevó a cabo un estudio de potencialización de la actividad insecticida, mediante el diseño de mezclas con los compuestos volátiles seleccionados. Finalmente, se estableció el efecto de las mezclas potencialmente tóxicas por inhalación y/o contacto y el de sus componentes, sobre enzimas desintoxicantes y de función motora extraídas del insecto. El objetivo 1 inicio con la determinación de la acción insecticida por contacto y fumigante de 51 CQs sobre S. zeamais. En el cual se establecieron 11 compuestos volátiles con actividad fumigante (compuestos de tipo hidrocarburo), 13 con toxicidad por contacto (fenilpropanoides, monoterpenoides oxigenados y cetonas alifáticas) y 13 con las dos vías de acceso insecticida (monoterpenoides con función orgánica cetona, éter y alcohol). Dentro de los cuales se resaltan a los enantiómeros de pulegona (CL50 < 0.1 mg/L y DL50 < 7.5 µg/adulto), como los compuestos con mayor efecto tóxico. Posteriormente, con los compuestos bioactivos se realizó un análisis cluster a partir de la efectividad insecticida, armando un perfil de características fisicoquímicas y estructurales para cada grupo. En el cual se logró establecer que los compuestos monoterpenoides monocíclicos con función orgánica cetona o alcohol e insaturación exocíclica son potenciales insecticidas de doble vía de acceso frente a S. zeamais. En el mismo sentido se describen las actividades realizadas en el objetivo 2, en el cual se hizo un prediseño de 29 mezclas ternarias con los compuestos volátiles tóxicos fumigantes y por contacto. Las combinaciones se sometieron a un análisis de superficie de respuesta, para establecer la influencia de la proporcionalidad, elaborando un total de 15 mezclas. Posteriormente, a estas mezclas se les estableció el potencial insecticida fumigante y/o por contacto y la interacción aditiva, sinérgica o antagónica de sus componentes, mediante el índice de combinación. De las cuales se determinaron 10 mezclas con acción insecticida promisoria, 8 que presentaron toxicidad por las dos rutas de acceso evaluadas y 5 que evidenciaron interacción sinérgica fumigante. De los resultados se resaltan la combinación M2 - CL50 0.48 mg/L (R-pulegona + S-pulegona + S-carvona), como la mezcla con mayor acción fumigante y a M20 - CL50 2.06 mg/L (isopulegona + δ-3-careno), como la combinación con mayor interacción sinérgica (IC = 0.26). Finalmente, en el objetivo 3 se estableció el efecto de las mezclas y sus componentes sobre la inhibición de acetilcolinesterasa (AChE), catalasa (CAT) y glutatión-S-transferasa (GST). Los resultados indicaron que algunas mezclas bioactivas y sus componentes inhiben en un nivel moderado a bajo la desintoxicación metabólica de GST y CAT, pero 7 mezclas y 8 de sus constituyentes inhiben en gran medida la AChE, en la cual 5 de las combinaciones presentan interacción sinérgica. En los resultados neurotóxicos se destacan las mezclas M20 (CI50 0.61 mg/L), M12 (CI50 0.81 mg/L) y su componente δ-3-careno (CI50 0.19 mg/L), como las sustancias que ejercen mayor efecto inhibitorio sobre la actividad de AChE, sugirieron que la acción insecticida de estas mezclas involucra más de un mecanismo de acción, al mostrar una reducción de dosis desfavorable para δ-3-careno. De esta manera el presente trabajo contribuye a la caracterización del efecto insecticida por dos vías de acceso de CQs de AEs, elabora algunas mezclas de metabolitos volátiles bioactivos potencializando el efecto insecticida y hace una aproximación a sus posibles mecanismos de acción, presentado nuevas sustancias que podrían usarse como principios activos de bioinsecticidas para el control de S. zeamais. (Texto tomado de la fuente).

Sitophilus zeamais is a cosmopolitan pest, causing losses of 15 to 50% in stored grains, essential products for food security. The most used method for its control is synthetic insecticides, which have disadvantages such as their high cost, high toxicity, and the generation of resistance. Therefore, it is necessary to develop phytosanitary agents that allow the efficient and safe control of this pest. In this regard, plants are a promising source of bioactive secondary metabolites, with a wide structural diversity, which can be used as safe and effective bioinsecticides. One way to obtain this type of substance is by extracting essential oils (EOs), which are characterized by being lipophilic mixtures of volatile compounds, which allow them to affect the metabolic and physiological functions and the behavior of insects in different ways. In this heuristic of phytosanitary agents, our research team during the last 14 years has evaluated more than 100 EOs against S. zeamais, coming from native plants and introduced in Colombia, contributing to the chemical characterization of plant species. Studies that allowed determining 26 oils with repellent and insecticidal action by contact and/or fumigant against S. zeamais. Although much progress has been made in the investigation of the insecticidal activity of EOs with promising results against S. zeamais, little emphasis has been placed on establishing which of its constituents are responsible for the bioactivity against the insect, the possible synergistic interactions, additive and/or antagonistic between its components, nor the possible mechanisms of action against enzymes involved in neurotransmission and cellular detoxification processes. In this sense, the present investigation determined the insecticidal action of chemical constituents (CQs) of bioactive EOs, selecting the compounds with the greatest fumigant and/or contact toxic effect on S. zeamais. Subsequently, a study of potentization of the insecticidal activity was carried out, by means of the design of mixtures with the selected volatile compounds. Finally, the effect of the potentially toxic mixtures by inhalation and/or contact and that of their components on detoxifying enzymes and motor function extracted from the insect was established. Objective 1 started with the determination of the insecticidal action by contact and fumigants of 51 CQs on S. zeamais. In which 11 volatile compounds with fumigant activity (hydrocarbon-type compounds) were established, 13 with contact toxicity (phenylpropanoids, oxygenated monoterpenoids, and aliphatic ketones), and 13 with a toxic effect on the two access routes of the insect (monoterpenoids with functional group ketone, ether, and alcohol). From the results obtained, it was found that the enantiomers of pulegone presented the highest insecticidal potential (LC50 < 0.1 mg/L and LD50 < 7.5 µg/adult), followed by carvacrol (LD50 = 8.71 µg/adult) and the enantiomers of carvone (LC50 < 2.9 mg/L y LD50 < 17.0 µg/adult). Subsequently, with the bioactive compounds, a cluster analysis was performed for each mode of action, based on the insecticidal effectiveness, assembling a profile of physicochemical and structural characteristics for each group. In which it was possible to establish that monocyclic monoterpenoid compounds with ketone or alcohol functional group and exocyclic unsaturation are potential insecticides with a double access route against S. zeamais. Thus, the activities carried out in objective 2 are described, in which a pre-design of 29 ternary mixtures was made with the volatile compounds with fumigant and contact toxic. The combinations were subjected to a response surface analysis, to establish the influence of proportionality, making a total of 15 mixtures. Subsequently, the fumigant and contact insecticidal potential of the 15 mixtures and the additive, synergistic or antagonistic interaction of their components, through the combination index, were established. 10 mixtures with promising insecticidal action were determined, of which 8 presented toxicity by the two access routes evaluated, and 5 showed synergistic interaction in the fumigant activity. The results highlight the combination M2 - CL50 0.48 mg/L (R-pulegone + S-pulegone + S-carvone), as the mixture with the greatest fumigant action, and M20 - CL50 2.06 mg/L (isopulegone + δ-3-carene), as the combination with the highest synergistic interaction (IC = 0.26). Finally, in objective 3, the effect of mixtures and their components on the inhibition of acetylcholinesterase (AChE), catalase (CAT), and glutathione-S-transferase (GST) was established. The results indicated that some bioactive mixtures and their components have a moderate to low effect on the metabolic detoxification of GST and CAT, but 7 mixtures and 8 of their constituents greatly inhibit AChE, in which 5 of the combinations show synergistic interaction. In the neurotoxic results, the mixtures M20 (IC50 0.61 mg/L), M12 (IC50 0.81 mg/L) and their component δ-3-careno (IC50 0.19 mg/L), as the substances that exert the greatest inhibitory effect on AChE activity. This suggested that the insecticidal action of these mixtures involves more than one mechanism of action, showing an unfavorable dose reduction for δ-3-careno. In this way, the present work contributes to the determination of the fumigant and contact toxicity of chemical constituents of EOs, such as those responsible for the activity of some oils. In addition, it makes some mixtures of volatile bioactive metabolites, potentiating the insecticidal effect and makes an approximation of its possible mechanisms of action. Therefore, this study presents new substances that could be used as active principles of bioinsecticides for the control of S. zeamais.