Optimización de una prueba farmacológica in vitro para la evaluación de sustancias con posible actividad frente a epimastigotes de Trypanosoma cruzi

Abstract

La enfermedad de Chagas causada por el parásito Trypanosoma cruzi, representa un problema de salud pública a nivel mundial. Su tratamiento está restringido a dos fármacos, Benznidazol y Nifurtimox, que poseen efectos adversos, eficacia limitada y su oportunidad de acceso es igualmente limitado. Las pruebas farmacológicas in vitro constituyen la herramienta inicial para el tamizaje de alternativas promisorias, sin embargo, en este caso particular, no existe un consenso en los protocolos utilizados, por lo que es fundamental optimizar una prueba farmacológica in vitro para evaluar sustancias con potencial actividad frente a Trypanosoma cruzi, con el fin de obtener resultados reproducibles y comparables que aporten al avance del desarrollo de nuevo fármacos. En el presente trabajo se optimizó las condiciones más relevantes usadas en las pruebas farmacológicas in vitro a partir de epimastigotes de la cepa Y de Trypanosoma cruzi. Se determinó que el parásito tiene un crecimiento sostenido hasta el día 8 con una estabilización o disminución a partir del día 9 de incubación. El recambio de medio de cultivo debe ser cada 3 días para garantizar un porcentaje de epimastigotes mayor al 90%. Para el cultivo óptimo del parásito se puede usar tanto el medio LIT como el BHI suplementado con 10 % de SFB. En cuanto a la prueba farmacológica se determinó que se puede usar indistintamente placas con fondo en U o fondo plano sin afectar el crecimiento del parásito, los mejores resultados los obtuvimos empleando una concentración de 1x10 6 parásitos/mL como inóculo inicial y una incubación de 72 horas. Se determinó una CI50 de 16,6 µM (4,32 µg/mL) de benznidazole frente a epimastigotes de T. cruzi de la Cepa Y, coincidente con reportes previos bajo las mismas condiciones. (Texto tomado de la fuente)

Chagas disease caused by the parasite Trypanosoma cruzi represents a worldwide public health problem. Its treatment is restricted to two drugs, Benznidazole and Nifurtimox, which have adverse effects, limited efficacy, and their opportunity for access is equally limited. In vitro pharmacological tests are the initial tool for screening promising alternatives, however, in this particular case, there is no consensus on the protocols used, so it is essential to optimize an in vitro pharmacological test to evaluate substances with potential activity against Trypanosoma cruzi, in order to obtain reproducible and comparable results that contribute to the advancement of the development of new drugs. In the present work, the most relevant conditions used in vitro pharmacological tests were optimized from epimastigotes of the Y strain of Trypanosoma cruzi. It was determined that the parasite has a sustained growth until day 8 with a stabilization or decrease from day 9 of incubation. The change of culture medium should be every 3 days to guarantee a percentage of epimastigotes greater than 90%. For optimal culture of the parasite, both LIT medium and BHI supplemented with 10% FBS can be used. Regarding the pharmacological test, it was determined that plates with a U-bottom or flat bottom can be used interchangeably without affecting the growth of the parasite; The best results were obtained using a concentration of 1x10 6 parasites / mL as initial inoculum and an incubation of 72 hours. An IC50 of 16.6 µM (4.32 µg/mL) of benznidazole was determined against epimastigotes of T. cruzi of Strain Y, which coincides with previous reports under the same conditions.