Desarrollo de una herramienta de cultivo continuo para la generación de mutantes inducidos por exposición a agentes antibacterianos

Abstract

Se estableció un cultivo continuo operado al 50% de la velocidad específica de crecimiento (= 0,2587 h -1 para E. coli; = 0,2695 h -1 para S. aureus), una vez estabilizado el crecimiento se adicionó Piperacilina/ Tazobactam a una concentración equivalente al 50% de la MIC hasta alcanzar la estabilidad de crecimiento. Luego, se aumentó la concentración de Piperacilina/ Tazobactam a 75% de la MIC hasta estabilidad y finalmente se incrementó hasta 1MIC. Con la herramienta propuesta, se logró la generación de microorganismos mutantes, resistentes a Piperacilina/ Tazobactam (32 veces más resistentes tanto para E. coli como para S. aureus), con el cultivo continuo en funcionamiento por aproximadamente 55 horas, de las cuales más o menos 40 horas correspondieron a exposición antibiótica, lo que es un tiempo relativamente corto y requiriendo un gasto bajo de material (caldo de cultivo gastado por hora) con una alta producción de biomasa (microorganismos resistentes a Piperacilina/ Tazobactam).

A continuous culture operated at 50% of the specific growth rate (= 0,2587 h -1 for E. coli; = 0,2695 h -1 for S. aureus) was established. Once growth had stabilized, Piperacillin/Tazobactam was added to a concentration equivalent to 50% of the MIC until growth stability is reached. Piperacillin/Tazobactam concentration was then increased to 75% of the MIC until stable and finally increased to 1MIC. With the proposed tool, the generation of mutant microorganisms resistant to Piperacillin/Tazobactam (32 times more resistant to both E. coli and S. aureus) was achieved, with continuous culture in operation for approximately 55 hours, of which more or less 40 hours corresponded to antibiotic exposure, which is a relatively short time and requires a low expenditure of material (culture broth spent per hour) with a high production of biomass (Piperacillin/Tazobactam resistant microorganisms).