Uso de diseño de experimentos para la optimización de la extracción de compuestos fenólicos en un extracto activo de Nectandra Reticulata

Abstract

La actividad agonista en LXR modula la producción de ApoE y ABCA1, disminuyendo la placa amiloide en modelos murinos, convirtiéndose así una alternativa terapéutica del Alzheimer. Estudios previos muestran que Nectandra reticulata es agonista de LXR, por lo que es de nuestro interés identificar la composición del extracto, relacionarlo con su actividad y optimizar la extracción de este. Es así cómo se analizó el extracto activo de N. reticulata, mediante RP-UHPLC-DAD y UHPLC-ESI-HRMS. Los resultados del análisis por EM evidenciaron que la mayoría de los compuestos presentes corresponden a flavonoides glicosilados. Para confirmar la identidad de las agliconas, se realizó una hidrólisis ácida, mostrando que el compuesto principal con un área cromatográfica de 84,5% a 355 nm corresponde a la quercitrina; el segundo compuesto en abundancia del 8,0% del área cromatográfica se identificó como afzelina. En menor proporción (6,9%) se determinó 3 o 7-(6''-p-cumaroilglucósido) kaempferol. Después de la identificación se realizaron estudios in silico e in vitro, permitiendo seleccionar a la quercitrina cómo marcador, ya que este metabolito presenta una actividad superior a la de los otros compuestos identificados e incluso de su respectiva aglicona. Finalmente se realizó la validación y optimización de la extracción de este metabolito, se encontró que al hacer la extracción asistida por ultrasonido la cantidad de quercitrina en el extracto y el rendimiento del proceso se ven influenciados principalmente por la proporción etanol:agua y la temperatura del sistema. La mejores condiciones de extracción encontradas fueron 60% de etanol, 50 °C y 40 mL/g (solvente:material vegetal). (Texto tomado de la fuente)

The agonistic activity of LXR modulates the production of ApoE and ABCA1, reducing amyloid plaque in murine models, that means a therapeutic alternative for Alzheimer's. Previous studies show that Nectandra reticulata is an LXR agonist, it is our interest to identify the composition of the extract, relate it to its activity and optimize its extraction. The active extract of N. reticulata was analyzed by RP-UHPLC-DAD and UHPLC-ESI-HRMS. The mass analysis showed that most of the compounds present correspond to glycosylated flavonoids. To confirm the identity of the aglycones, acid hydrolysis was performed. There it was shown that the main compound with a chromatographic area of 84.5% at 355 nm corresponds to quercitrin; the second compound in abundance of 8.0% of the chromatographic area was identified as afzeline. In a smaller proportion (chromatographic area 6.9%) 3 or 7-(6''-p-coumaroylglucoside) kaempferol were found. After the identification, in silico and in vitro studies of the molecules were carried out, these studies allowed quercitrin to be selected as a marker, since this metabolite has a higher activity than the other identified compounds and even of its respective aglycone. Finally, the validation and optimization of the extraction of this metabolite was carried out, it was found that when performing the extraction assisted by ultrasound, the amount of quercitrin in the extract and the performance of the process are mainly influenced by the proportion of ethanol:water and temperature of the system. The best extraction conditions were 60% ethanol, 50 °C and 40 mL/g (solvent:plant material ratio).