Biosíntesis de nanopartículas de plata a partir de hongos rizosféricos y su inmovilización en una fibra natural para el control in vitro de la bacteria fitopatógena (Pectobacterium carotovorum)

Abstract

En esta investigación inicialmente se realizó un estudio de bioprospección para seleccionar hongos rizosféricos de cultivos de papa, hongos promisorios para la síntesis de AgNp´s con acción antibacterial frente a Pectobacterium carotovorum, agente fitopatógeno de papa de difícil manejo por técnicas convencionales. Se aislaron cinco hongos de las especies Penicillium simplicissimum, Aspergillus niger y Fusarium oxysporum que produjeron AgNp´s esféricas de tamaños entre 15 y 45 nm, las cuales presentaron acción antibacterial frente al fitopatógeno. Empleándose a Fusarium oxysporum se encontró que al usar una solución de AgNO3 3mM, pH de 10, y 27 °C/24 h se obtiene el mayor rendimiento en la síntesis de AgNp´s. Posteriormente, estas nanopartículas fueron caracterizadas por TEM, FTIR, XRD, DLS. PI y potencial Z, tras lo cual su poder antibacterial frente al fitopatógeno Pectobacterium carotovorum fue estudiado, encontrándose zonas de inhibición de crecimiento de hasta 11,3 mm de diámetro cuando se emplea una dosis de 100 ppm y una MIC de 25 y 50 ppm, determinada por micro y macrodilución respectivamente. También se realizaron estudios a nivel del sustrato vegetal, evidenciándose un efecto protector sobre el tubérculo cuando se aplica una dosis de 100 ppm de AgNp´s sobre el tejido a manera de tratamiento preventivo. Posteriormente y para limitar la absorción de las nanopartículas en el tubérculo se realizaron pruebas de inmovilización de las AgNp´s sobre fibras de algodón quirúrgico por dos metodologías (cationización y reducción bioquímica in situ), obteniéndose dos tipos de fibras denominadas A-AgNp´s-C y A-AgNp´s-RBi. Fibras que mostraron zonas de inhibición de crecimiento del Pectobacterium carotovorum, con una disminución en los recuentos bacterianos a las 24 horas e inhibición de crecimiento a las 48 horas. Donde las pruebas de reuso de estas fibras con nanopartículas mostraron que los dos tipos fibras pueden tener hasta tres usos sucesivos sin perder su efectividad, independientemente del método de modificación empleado. Adicionalmente, es importante resaltar que las pruebas de retención de las AgNp´s indicaron que estas permanecen adheridas a las fibras A-AgNp´s-C y a las fibras A-AgNp´s-RBi después de dos y tres lavados sucesivos, respectivamente. Finalmente, las AgNp´s biosintetizadas se adhirieron a fibras de fique por cationización con el objetivo de obtener sacos antibacteriales de 10 x 12 cm, los cuales en pruebas in vivo presentaron tan solo un 7,8 % de afectación, mientras que tubérculos almacenados en un saco tradicional tuvieron una afectación del 25%. Por lo tanto, el empleo de hongos rizosféricos para la síntesis de AgNp´s con acción nanopesticida frente al fitopatógeno P. carotovorum y su inmovilización en fibras naturales, permitirá el desarrollo de una aplicación nanobiotecnológica en el campo de embalajes para el almacenamiento de papa, con posibilidades de escalamiento, lo que aunará en la implementación de prácticas de agricultura de precisión. (Texto tomado de la fuente)

In this research, a bioprospecting study was initially carried out to select rhizospheric fungi from potato crops, promising fungi for the synthesis of AgNPs with an antibacterial action against Pectobacterium carotovorum, a potato phytopathogenic agent that is difficult to manage by conventional techniques. Five fungi of Penicillium simplicissimum, Aspergillus niger, and Fusarium oxysporum that produce spherical AgNPs between 15 and 45 nm in size were isolated and showed antibacterial action against the phytopathogen. Using Fusarium oxysporum, it was found that using a solution of AgNO3 3mM, pH 10, and 27 °C/24 h obtained the highest yield in AgNPs synthesis. Subsequently, these nanoparticles were characterized by TEM, FTIR, XRD, DLS, PI and Z-potential, after which their antibacterial power against the phytopathogen Pectobacterium carotovorum was studied, finding growth inhibition zones up to 11.3 mm in diameter when using a dose of 100 ppm and a MIC of 25 and 50 ppm, determined by micro and macrodilution, respectively. Studies were also carried out at the plant substrate level, showing a protective effect on the tuber when a dose of 100 ppm of AgNPs was applied to the tissue as a preventive treatment. Subsequently, and to limit the absorption of the nanoparticles in the tubercle, immobilization tests of AgNPs on surgical cotton fibers were carried out by two methodologies (cationization and in situ biochemical reduction), obtaining two types of fibers called A-AgNPs-C and A-AgNPs-RBi. These fibers showed growth inhibition zones of Pectobacterium carotovorum, with a decrease in bacterial counts at 24 hours and growth inhibition at 48 hours. The reuse tests of these fibers with nanoparticles showed that the two types of fibers could have up to three successive uses without losing their effectiveness, regardless of the modification method used. Additionally, it is important to highlight that the retention tests of the AgNPs indicated that they remain attached to the A-AgNPs-C and A-AgNPs-RBi fibers after two and three successive washes, respectively. Finally, the biosynthesized AgNPs were adhered to fique fibers by cationization to obtain antibacterial 10 x 12 cm sacks, which in in vivo tests showed only 7.8% of affectation, while tubers stored in a traditional sack had an affectation of 25%. The use of rhizospheric fungi for the synthesis of AgNPs with nanopesticidal action against the phytopathogen P. carotovorum and their immobilization in natural fibers will allow the development of a nanobiotechnological application in the field of potato storage packaging, with the possibility of scaling up, which will contribute to the implementation of precision agriculture practices.