Evaluación de la muerte de oligodendrocitos causada por el virus de distemper canino en cerebro de animales naturalmente infectados
Tipo de contenido
Trabajo de grado - Maestría
Idioma del documento
EspañolFecha de publicación
2024-02-01Resumen
El Distemper Canino (CDV) es un virus de la familia Paramixoviridae y género Morbillivirus que afecta a caninos y otros mamíferos carnívoros, causando la enfermedad conocida como Distemper canino (DC) o "Moquillo canino". Este virus, se considera inmunosupresor y puede inducir la muerte de células inmunitarias, facilitando infecciones secundarias. En su fase neurológica, considerada terminal, provoca desmielinización en el sistema nervioso central (SNC) y periférico (SNP). Aunque la apoptosis se ha relacionado con la muerte celular en el SNC, se desconoce el mecanismo molecular de muerte celular específica en células mielinizantes (oligodendrocitos). Metodología: Se diseño un estudio descriptivo transversal cuyo objetivo fue dilucidar si la apoptosis participa como mecanismo de muerte de oligodendrocitos en la enfermedad desmielinizante causada por CDV en caninos infectados naturalmente. Se evaluaron muestras parafinadas cerebrales y cerebelares postmortem de 17 caninos positivos para CDV y 10 caninos control de la colección del Laboratorio de Patología Animal de la Universidad Nacional de Colombia. En estas, se buscó determinar: 1) la presencia y activación de proteínas proapoptóticas (Caspasa 3 clivada, Caspasa 9 clivada) en áreas desmielinizadas de cerebro y cerebelo a través de inmunofluorescencia. y 2) la presencia viral y expresión de genes proapoptóticos (Casp3, Casp9, BAX) y antiapoptóticos (BCL-2) mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real por transcriptasa inversa (RT-qPCR). Resultados: En la inmunofluorescencia se evidenció un aumento significativo de la activación y presencia de proteínas proapoptóticas (Caspasa 3 clivada: p = <0.0001, Caspasa 9 clivada: p = <0.0001) en áreas de desmielinización tanto en corteza como en cerebelo de los animales caso con respecto a animales control. Por otra parte, los resultados de los RT-qPCR arrojaron resultados significativos en la expresión de caspasa 3 (p = 0.0297), pero no mostraron cambios significativos en los demás genes proapoptóticos como caspasa 9 (p = 0.4437) y BAX (p = 0.6134), ni antiapoptóticos como BCL-2 (p = 0.3910). Estos hallazgos sugieren una asociación directa entre el virus del distemper canino y la apoptosis de los oligodendrocitos, destacando la complejidad de las respuestas celulares y genéticas involucradas en la patogénesis de esta enfermedad. Sin embargo existen limitantes en el estudio como el tamaño de la muestra que pueden afectar los resultados de forma significativa, además del uso de muestras parafinadas que pueden afectar la extracción y los índices de calidad de los ácidos nucleicos de la muestra de RNA para el RT-qPCR. (Texto tomado de la fuente).Abstract
Canine Distemper (CDV) is a virus belonging to the Paramyxoviridae family and Morbillivirus genus that affects canines and other carnivorous mammals, causing the disease known as Canine Distemper (CD) or "Canine Distemper." This virus is considered immunosuppressive and can induce the death of immune cells, facilitating secondary infections. In its neurological phase, considered terminal, it causes demyelination in the central and peripheral nervous systems (CNS). Although apoptosis has been linked to cell death in the CNS, the specific molecular mechanism of cell death in myelinating cells (oligodendrocytes) is unknown. Methodology: A descriptive cross-sectional study was designed to elucidate whether apoptosis participates as a mechanism of oligodendrocyte death in the demyelinating disease caused by CDV in naturally infected canines. Postmortem brain and cerebellum paraffin samples from 17 CDV-positive canines and 10 control canines from the Animal Pathology Laboratory collection at the National University of Colombia were evaluated. The study aimed to determine: 1) the presence and activation of proapoptotic proteins (cleaved Caspase 3, cleaved Caspase 9) in demyelinated areas of the brain and cerebellum through immunofluorescence, and 2) the viral presence and expression of proapoptotic genes (Casp3, Casp9, Bax) and antiapoptotic genes (Bcl-2) through real-time reverse transcription polymerase chain reaction (RT-qPCR). Results: Immunofluorescence revealed a significant increase in the activation and presence of proapoptotic proteins (cleaved Caspase 3: p < 0.0001, cleaved Caspase 9: p < 0.0001) in demyelinated areas in both the cortex and cerebellum of case animals compared to control animals. On the other hand, RT-qPCR results showed significant outcomes in the expression of caspase 3 (p = 0.0297), but no significant changes in other proapoptotic genes such as caspase 9 (p = 0.4437) and BAX (p = 0.6134), nor in antiapoptotic gene BCL-2 (p = 0.3910). These findings suggest a direct association between the canine distemper virus and apoptosis of oligodendrocytes, highlighting the complexity of cellular and genetic responses involved in the pathogenesis of this disease. However, there are limitations in the study, such as the sample size, which could significantly impact results, and the use of paraffin samples, which may affect the extraction and purity of RNA for RT-qPCR.Palabras clave
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