Caracterización de vesículas extracelulares tipo exosomas con marcador VEGF en un modelo de cáncer de mama

Abstract

Los exosomas, un tipo de vesícula extracelular, emergen en condiciones fisiológicas y patológicas como en el cáncer de mama, desempeñando un papel clave en la comunicación intercelular dentro y fuera del microambiente tumoral. Para comprender su función es esencial realizar la caracterización física y molecular de su composición, así como establecer sus interacciones en contextos biológicos. En este trabajo, se obtuvieron exosomas provenientes del cultivo in vitro de la línea celular de cáncer de mama MCF7. En condiciones de normoxia, se evaluaron dos métodos comerciales, uno basado en cromatografía de exclusión por tamaño y otro en filtración dirigida. Los exosomas purificados se compararon con los obtenidos mediante el método tradicional de ultracentrifugación diferencial, y la cromatografía de exclusión por tamaño se seleccionó como el método con mayor rendimiento, economía y accesibilidad para la purificación de exosomas. Posteriormente, se obtuvieron exosomas de la misma línea celular en condiciones de hipoxia mimética inducida por cloruro de cobalto, observando una disminución tanto en la producción como en el tamaño de los exosomas comparados a la condición de normoxia, sumado a una mayor producción de VEGF, aunque no estuvo asociado directamente a los exosomas. Finalmente, se observó que los exosomas producidos en hipoxia mimética favorecen la migración en células MCF7 y promueven características específicas en la formación de tubos en la angiogénesis inducida sobre células HUVEC (Texto tomado de la fuente).

Exosomes, a type of extracellular vesicle, arise in physiological and pathological conditions, such as breast cancer. They play a crucial role in intercellular communication within and outside the tumor microenvironment. To comprehend their function, it is essential to conduct a physical and molecular characterization of their composition and establish their interactions in biological contexts.

In this work, exosomes were obtained from in vitro culture of the MCF7 breast cancer cell line. Under normoxic conditions, two commercial methods were evaluated, one based on size exclusion chromatography and the other on targeted filtration. Purified exosomes were compared with those obtained through the traditional method of differential ultracentrifugation, and size exclusion chromatography was chosen as the most economical and accessible method for exosome purification.

Subsequently, exosomes were produced by the same cell line under conditions of mimetic hypoxia induced by cobalt chloride, showing a decrease in the production and size of exosomes compared to normoxia. Additionally, it was identified that VEGF was produced in higher concentrations under hypoxic conditions, although it was not associated with exosomes. Finally, it was observed that exosomes produced under mimetic hypoxia promote migration in MCF7 cells and promote specific characteristics in tube formation in angiogenesis induced in HUVEC cells.