Evaluación de la respuesta postvacunal a peste porcina clásica por medio de diferentes pruebas diagnósticas en cerdos desafiados experimentalmente

Abstract

El propósito de este trabajo fue evaluar dos vacunas comerciales de Peste Porcina Clásica (PPC) utilizadas en Colombia elaboradas con la cepa China. El diseño experimental consistió en un grupo de treinta (30) cerdos provenientes de una explotación intensiva tecnificada convencional, de 50 días de edad en promedio, no vacunados a PPC, con una distribución homogénea de sexos, lo cual permitió la conformación de tres grupos: 12 animales para el grupo ¨A¨, 12 animales para el grupo ¨B¨ y 6 animales para el grupo ¨C¨. Al grupo A y B se les aplico a cada uno una vacuna comercial y el grupo C se dejó como control. Estos animales permanecieron en unidades experimentales separadas por grupos por un periodo de 30 días, tiempo en el cual se vacunaron los animales al día 1, posteriormente a esto se desafiaron con una cepa de campo colombiana (cepa Santander) al día 16 post-vacunación. En el periodo de experimentación se tomaron diferentes muestras tales como: sangre completa, hisopados nasales, hisopados rectales y tejidos, buscando establecer la dinámica del virus vacunal y de desafío, en cuanto a la respuesta serológica, viremia, posible excreción viral y efecto biológico sobre la población experimental. Para esto se utilizaron varias metodologías diagnósticas para la detección de anticuerpos (ELISA- Ac y NPLA), antígeno (ELISA- Ag, aislamiento viral e IHQ) y detección del ácido nucleico (ARN) (RTPCR anidada E2 y RT-qPCR 5’UTR) del virus de PPC. Se encontró que las dos vacunas confieren un alto grado de protección, generando una adecuada respuesta inmune protectiva postvacunal, no producen excreción viral activa, no hubo una viremia postvacunación evidente, limitó la excreción del virus de desafío y su aislamiento, mostrando protección evidente frente al desafío de campo con una cepa de moderada patogenicidad como lo es la cepa Santander. Se encontró además que las dos vacunas no produjeron cuadros clínicos evidentes, ni lesiones macro y microscópicas que se puedan relacionar con la acción propia del virus de PPC de tipo vacunal. Por otra parte, se evidenció que la seroconversión evaluada por ELISA comenzó a detectarse a los quince días post vacunación en algunos animales, no obstante en la totalidad de los animales no se evidenció la seroconversión, no se presentaron cuadros clínicos ni lesiones macro o microscópicas después del reto en los animales vacunados. De igual forma no se identificó en la totalidad de animales vacunados la distribución del antígeno vacunal, pero si el de campo después del reto en los tejidos evaluados tanto en animales vacunados como los controles. Para el caso de los animales control, se evidenció el cuadro clínico y las lesiones macro y microscópicas propias del efecto del virus de PPC, la seroconversión y la presencia del antígeno y el ácido nucleico (ARN) del virus de PPC en suero determinados por las técnicas utilizadas. Por otra parte se pudo observar que la RT-qPCR 5’UTR es una técnica más sensible para detectar el ARN viral pues facilitó la detección del virus de PPC tanto vacunal como de campo en una mayor número de animales en los tres grupos evaluados con respecto a la RT-PCR anidada E2. / Abstract. The purpose of this study was to evaluate two commercial vaccines for classical swine fever (CSF) prepared with Chinese strain used in Colombia. The experimental design consisted of a group of thirty (30) pigs from a conventional swine farm, 50 days age on average without previous vaccination against classical swine fever virus (CSFV), with a gender homogeneous distribution. These animals were divided in three groups: 12 animals for the group ¨ A¨ 12 animals for group ¨B¨ and 6 animals for group ¨ C ¨. Group A and B were vaccinated with commercial vaccines and group C was left as a control. These animals were kept in separated experimental units for a period of 30 days, at which time the animals were vaccinated on day 1, then they were challenged with a Colombian field strain (strain Santander) 16 days post-vaccination (d.p.v.). During the experimental period various types of samples such as whole blood, nasal swabs, rectal swabs and tissues were taken, in order to establish the dynamics of the vaccine virus and the challenge strain. The serological response, viremia, viral shedding and possible biological effects on the experimental population were evaluated. For this purpose, several diagnostic methods were used to detect antibodies (ELISA-Ac and NPLA), antigen (Ag-ELISA, virus isolation and IHC) and to detect nucleic acid (RNA) (nested RT- PCR - E2 and RT-qPCR 5 'UTR) of CSF virus. It was found that the two vaccines conferred a high degree of protection, generating a protective immune response, they did not produce active viral shedding, and there was no clear post-vaccination viremia, and there was limited excretion of challenge virus and its isolation failed. These findings showed protection against challenge with a moderate pathogenic field strain. It was also found that the two vaccines produced no obvious clinical or gross and microscopic lesions. On the other hand, it was shown that antibodies response assessed by ELISA began at fifteen days post-vaccination in some animals; however, other animals did not show any evidence of seroconvertion. There was no clinical, gross or microscopic lesion after challenge with a field strain in vaccinated animals. In addition the viral vaccine antigen was identified in some vaccinated animals but not in all of them. However, the challenge virus was detected in the tissues of both vaccinated and control animals control animals. Clinical, gross and microscopic lesions characteristic of the CSFV effects, seroconvertion and the presence of antigen and nucleic acid (RNA) virus was demonstrated in the control animals. Finally it was noticed that the 5'UTR RT-qPCR, seems to be a more sensitive technique to detect viral RNA as it facilitated the detection of CSFV virus vaccine and field strain both in a greater number of animals in the three groups evaluated in comparison to nested RT-PCR of E2.