Determinación de sexo en chigüiro (Hydrochoerus hydrochaeris) mediante herramientas moleculares: Posibles usos forenses

Abstract

El chigüiro (Hydrochoerus hydrochaeris) ha sido considerado una especie promisoria para el desarrollo económico de la región Orinoquia en Colombia, por lo que el Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial (MAVDT) adelanta actualmente la normatividad requerida para avalar un cupo global de aprovechamiento de esta especie. Sin embargo, por la estructura social de este roedor se requiere que la caza de machos sea mayor que la de hembras. En consecuencia, la presente investigación busco brindar una herramienta al Ministerio, para realizar los controles (en los individuos sacrificados) que garanticen una caza basada en el sexo y no en el tamaño del animal, como se hace actualmente en la caza furtiva. Para esto se intentó estandarizar la PCR sobre dos marcadores moleculares, el gen Amelogenina (AMEL) y la región conservada HMG del gen SRY (SRY-HMG) ubicados en los cromosomas X y Y respectivamente. Las muestras se tomaron de diez machos y ocho hembras (pelo y sangre), Para Amelogenina se tomaron los primers de Snead et al (1985) y se logró estandarizar la metodología de amplificación en ratón y en chigüiro. Las PCR para SRY-HMG fueron realizadas con dos set de primers, el set inicial se diseño por medio del programa primer3 y el segundo fue tomado de Sánchez et al (1996).. Ninguno de los set de primers empleados para SRY-HMG pudo amplificar un segmento homólogo a SRY en el ADN genómico de H. hydrochaeris. No obstante, los primers de Sánchez et al (1996) amplificaron en machos de Mus musculus el producto esperado y un producto inespecífico solo en machos de chigüiro, cuya secuencia no es homologa a ninguna de las reportadas en bases de datos. Con la colaboración del Dr. Sánchez también se realizó southern blot para el gen SRY con ADN de chigüiro sin obtener señalización positiva. Con los resultados obtenidos, se especula que en H. hydrochaeris el gen SRY esta ausente o la caja HMG ha tenido cambios profundos, por lo que la determinación de sexo en chigüiro podría ser independiente de este gen. Se discuten también otros genes candidatos a determinar la masculinidad en este roedor. Debido a que el gen de Amelogenina se encuentra solo en el cromosoma X en los roedores, la sola evaluación de esta secuencia no sería útil para la determinación de sexo en Chigüiro. Sin embargo el uso conjunto con la secuencia de 550 pb específica de machos de este roedor; resulta útil para la identificación molecular de sexo de esta especie (Texto tomado de la fuente).

The capybara (Hydrochoerus hydrochaeris) has been considered a promising species for the economic development of the Orinoco region in Colombia. Therefore, the Colombian Ministry of Environment, Housing and Territorial development (MAVDT) is currently preparing regulations to ensure the global quota for exploitation of this species. However, the social structure of this rodent necessitates that the hunt of males should be greater than that of females. Consequently, this research focused on provididing a molecular tool for the controls (in individuals killed) ensuring that the gender of the prey is the primary hinting criterion, not the size of the animal, as is currently done in poaching. In this study we attempted to standardize the PCR on two molecular markers, Amelogenin gene (AMEL) and HMG conserved region of the SRY gene (SRY-HMG) located on chromosomes X and Y respectively. The samples were taken from ten males and eight females (hair and blood), The Amelogenin primers were taken from Snead et al (1985). And it was possible to standardize a methodology to amplify the sequences both in mice and chiguiro. The PCR for SRY-HMG were performed with two sets of primers, the first one designed by the Primer3 program and the second one taken from Sanchez et al (1996). Neither set of primers used for SRY-HMG could amplify a segment homologous to SRY in genomic DNA of H. hydrochaeris. Although the primers of Sanchez et al (1996) amplified the expected product in male Mus musculus, that was not possible in capybara. Nonetheless, a non-specific product was observed only in male, whose sequence is not homologous to any of those reported in databases. Southern blot was also performed on this SRY gene (with the collaboration of Dr. Sanchez from the University of Jaen, but no positive signs were observed with capybara´s DNA. These results suggest that in H. hydrochaeris, either the SRY gene is absent, or the HMG box has undergone profound evolutionary changes, to the point that sex determination in capybara could be independent of this gene. Other genes are also discussed as candidates to determine masculinity in this rodent. Due to the fact that Amelogenin gene is only found on X chromosome in rodents, the sole evaluation of this sequence would not be useful to sex determination in capybara. However, its joint use with male´s specific sequences of 550 pb of this rodent, results useful to molecular sex determination of this species might be obtained.