Estudio fisiológico de un transportador aniónico de Leishmania mediante complementación de una línea knock out de Saccharomyces cerevisiae

Abstract

Durante su ciclo de vida, el parásito Leishmania habita en dos ambientes muy diferentes en cuanto a temperatura, osmolaridad y pH; uno, el tracto digestivo del vector invertebrado y el segundo, la vacuola parasitófora de la célula hospedera mamífera. Para superar este reto, el parásito, debe expresar diferencialmente distintos transportadores en membrana plasmática y compartimientos intracelulares. Entre ellos se encuentran los transportadores aniónicos, como los de la familia ClC. El genoma de Leishmania braziliensis presenta cuatro genes de canales de cloruro putativos. En este estudio se evaluó el efecto de la transformación del knock out Δgef1 (co-transportador Cl-/H+) de Saccharomyces cerevisiae con los genes LbClCA y LbClCB, transportadores de cloruro putativos de L. braziliensis, mediante ensayos de crecimiento en tres medios de cultivo diferentes (con quelante de hierro, con fuente de carbono no fermentable y suplementado con sales). En los medios de cultivo con quelante de hierro y no fermentable, los controles positivos crecieron mientras que las cepas transformadas con los genes de L. braziliensis no. En el medio de cultivo suplementado con sales no se evidenciaron diferencias entre las cepas. Los resultados obtenidos indican que los genes de L. braziliensis no complementan la cepa knock out Δgef1 (Texto tomado de la fuente).

During its life cycle, Leishmania parasites live in two different environments in terms of temperature, osmolarity and pH, the digestive tract of the invertebrate vector and the parasitophorous vacuole of the mammal host cell. To overcome this challenge, the parasite has to differentially express different kinds of transporters in the cell membrane and in the intracellular compartments. Among these, we find the anionic transporters, such as the members of the ClC family. The Leishmania braziliensis genome has four chloride channel putative genes. This study evaluated the effect of the transformation of the knock out Δgef1 (a Cl-/H+ co- transporter) strain from Saccharomyces cerevisiae with the LbClCB and LbClCA genes, putative chloride transporters from L. braziliensis, it was assessed by growth assays using three different culture media (with an iron chelator, with non-fermentable carbon sources and supplemented with salts). In culture media with the iron chelator and the non-fermentable carbon sources, positive controls grew while the strains transformed with the L. braziliensis genes did not. The strains showed no differences when cultured on medium supplemented with salts. The results indicate that the genes of L. braziliensis did not complement the knockout strain Δgef1.