Diseño y evaluación de péptidos insecticidas para el control de Aedes aegypti

Abstract

As a consequence of the development of insecticide resistance in Aedes aegypti, there is a need to find new molecules to control it. Bioactive peptides are considered promising natural products due to their broad spectrum of antimicrobial and insecticidal activity. Previous work has shown the potential of alpha-helix protein fragments as insecticides. In this work, using in silico prediction methods were designed peptides with oral insecticidal activity for Ae. aegypti larvae, from the design of analogs of the insecticidal peptide BTM-P1 and the search for other segments alpha-helix present in domain I of Cry and Cyt toxins from Bacillus thuringiensis. Three BTM-P1-like peptides and a 16 amino acid segment were found in the Cyt2Aa toxin, called CBYH3, with insecticidal potential and no or reduced hemolytic activity. Molecular dynamics also validated the toroidal pore formation mechanism of BTM-P1 on a simplified eukaryotic membrane model. The cellular damage caused by BTM-P1 and CBYH3 and their association to the mitochondria and peritrophic matrix was observed in the mosquito gut using the immunogold technique.

Como consecuencia del desarrollo de resistencia a insecticidas en Ae. aegypti, existe la necesidad de encontrar nuevas moléculas para su control. Los péptidos bioactivos son considerados como productos naturales promisorios debido a su amplio espectro de actividad como antimicrobianos e insecticidas. Trabajos previos han demostrado el potencial de fragmentos de proteínas de conformación alfa-hélice, como insecticidas. De acuerdo con lo anterior, en este trabajo, utilizando métodos de predicción in silico, se estudiaron péptidos con actividad insecticida vía oral para larvas de Aedes aegypti, a partir del diseño de análogos del péptido insecticida BTM-P1 y de la búsqueda de otros segmentos alfa-hélice presentes en dominio I de las toxinas Cry y Cyt de Bacillus thuringiensis. Se encontraron tres péptidos análogos a BTM-P1 y un segmento de 16 aminoácidos en la toxina Cyt2Aa, denominado CBYH3, con potencial insecticida y actividad hemolítica nula o reducida. También se validó por dinámica molecular el mecanismo formación de poros toroidales de BTM-P1 sobre un modelo simplificado de membrana eucariota y se observó el daño celular causado por BTM-P1 y CBYH3 y su aparente asociación con mitocondrias y la matriz peritrofica en el intestino de los mosquitos utilizando la técnica de inmunolocalización immunogold.