Línea transgénica de Nicotiana tabacum expresando el gen phaC de Aeromonas caviae para la producción de polihidroxialcanoatos

Abstract

Los polihidroxialcanoatos (PHAs) son poliésteres producidos y degradados naturalmente por bacterias, cuyas propiedades los hacen similares a los plásticos derivados del petróleo. La producción en masa de PHAs es costosa, por ello la transferencia genética de genes clave y su producción en plantas se ha considerado como alternativa, dado que estos organismos tienen un bajo costo de mantenimiento y por qué pueden generar mayor biomasa. Sin embargo, uno de los problemas principales que han limitado su obtención, es que generalmente las plantas presentan problemas de desarrollo y crecimiento asociados al secuestro de sustancias claves para el metabolismo y dirigidas hacia la síntesis de PHAs. Hallazgos recientes han identificado que su biosíntesis en peroxisomas reduce los efectos negativos debido a la presencia y abundancia de compuestos intermediarios en la ruta de biosíntesis de estos biopolímeros. Por esta razón, nuestros objetivos se centraron en obtener líneas genéticamente modificadas de Nicotiana tabacum var. Samsun 10, transformadas mediante la infección con Agrobacterium tumefaciens cepa LBA4404 y en evaluar la expresión del casete que dirige la síntesis del gen phaCAC de Aeromonas caviae hacia peroxisomas. Los resultados de la extracción del ADN indicaron una eficiencia de transformación del 2,6%, la síntesis de ADNc y la evaluación de la actividad de la β-glucuronidasa, detectaron dos líneas transgénicas que expresaron el gen phaCAC sin efectos negativos aparentes. (Texto tomado de la fuente)

Polyhydroxyalcanoates (PHAs) are polyesters naturally produced and degraded by bacteria, whose properties make them like plastics derived from petroleum. Mass production of PHAs by bacteria is expensive, so genetic transfer of key genes and production in plants has been considered as an alternative given the low maintenance cost and larger biomass than plants can generate. However, one of the main problems that have limited plant production is that plants generally present developmental and growth problems associated with capture of key substances for metabolism and directed towards PHA synthesis. Recent findings have identified that PHAs biosynthesis in peroxisomes reduces negative effects due to the presence and abundance of intermediate compounds in the biosynthesis path of these biopolymers. For this reason, our objectives focused on obtaining genetically modified lines of Nicotiana tabacum var. Samsun 10, transformed by infection with Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404, and in to evaluate the expression of the construct that directs the synthesis of the phaCAC gene from Aeromonas caviae towards plant peroxisomes. DNA extraction results indicated 2.6% transformation efficiency and DNAc synthesis and evaluation of β-glucuronidase activity, detected two transgenic lines expressing the gene without apparent negative effects.