Un tercer tipo de cascada de fototransducción

Abstract

Tradicionalmente los fotorreceptores animales se han dividido en 1-ciliados, que se hiperpolarizan con la luz y transducen mediante una proteína Gt; y 2-rabdoméricos, que son despolarizantes y utilizan una proteína Gq. En ciertos moluscos existen fotorreceptores hiperpolarizantes y ciliados, estos usan mecanismos novedosos para generar la foto-respuesta, pero detalles aún se desconocen. En esta tesis se buscó en la retina el bivalvo Pecten irradians la identidad molecular del fotopigmento implicado. Se utilizó el transcriptoma para diseñar primers y amplificar por PCR cDNAs que resultaron homólogos a una clase novedosa de rodopsinas putativas, posiblemente acopladas a proteínas Go. Extensión de los amplicones por RACE arrojó la secuencia codificante completa. Hibridación in situ permitió ubicar los transcritos en la capa distal de la retina. Un anticuerpo contra esta proteína localizó su presencia específicamente en la membrana de fotorreceptores ciliados. El cDNA fue insertado en fusión con proteínas fluorescentes en vectores de expresión, y se demostró su expresión heteróloga en diversas líneas celulares.

Abstract. Traditionally animal photoreceptors have been divided into 1-ciliary, which hyperpolarize in response to light and transduce via a Gt protein, and 2- rabdomeric, which are depolarizing and use a Gq protein. Some mollusks have hyperpolarizing ciliary photoreceptors that use novel mechanisms to produce a photo-response, but the details are still unknown. The molecular identity of the photopigment implicated was examined in the retina of the bivalve Pecten irradians. Using the transcriptome of Pecten retina, primers were designed to amplify by PCR, cDNAs which turned out to be homologous to a novel class of putative opsins, possibly coupled to Go proteins. RACE extensions of the amplicons yielded the complete coding sequence which we named pScop2. In Situ hybridization allowed the localization of the transcripts for pScop2 specifically in the distal layer of the retina. Antibodies raised against this opsin, located the protein specifically in the membrane of the ciliary photoreceptors. Finally, pScop2 cDNA was fused with fluorescent proteins in expression vectors and was successfully expressed in diverse cellular lines for future physiological experiments.