La combinación de la actividad metabólica de cepas bacterianas potencializa la actividad antimicrobiana contra microorganismos patógenos, en comparación con la actividad que pueden presentar las cepas microbianas en forma individual. La formulación mixta de bacterias acido lácticas ha sido estudiada para la producción de preparados probióticos con actividad antimicrobiana contra patógenos. Listeria monocytogenes es considerado un microorganismo patógeno para el hombre y animales, causando principalmente, la enfermedad conocida como listeriosis. Se evaluó la actividad antimicrobiana de una formulación mixta de Lactobacillus brevis y Weisella cibaria frente a Listeria monocytogenes. L. brevis y W. cibaria se reprodujeron por fermentaciones en discontinuo durante 48 horas. Se midió la cinética de la actividad antimicrobiana contra L. monocytogenes en los siguientes tiempos de fermentación, 0, 1, 2, 6, 12, 24 y 48 horas. En cada tiempo, la actividad antimicrobiana de la mezcla de cepas se comparó con la actividad antimicrobiana de las cepas en forma individual. La actividad antimicrobiana se midió mediante el diámetro de Feret, utilizando un software de evaluación de imágenes. Se encontró que la actividad antimicrobiana de la mezcla de cepas contra L. monocytogenes fue estable desde la segunda hora de fermentación hasta las 48 horas. A partir de 18 horas de fermentación la mezcla de cepas presentó actividad antimicrobiana superior, comparada con las cepas individuales. Los resultados indican que la formulación mixta de L. brevis y W. cibaria podría ser una opción biotecnológica para el desarrollo de antimicrobianos naturales para el control y prevención de L. monocytogenes.The combination of the metabolic activity of bacterial strains potentiates the antimicrobial activity against pathogenic microorganisms, in comparison with the activity that the microbial strains can present individually. The mixed formulation of lactic acid bacteria has been studied to the production of probiotic preparations with antimicrobial activity against pathogens. Listeria monocytogenes is considered a pathogenic microorganism for man and animals, causing the disease known as listeriosis. The antimicrobial activity of a mixed formulation of Lactobacillus brevis and Weisella cibaria was evaluated against Listeria monocytogenes. L. brevis and W. cibaria were reproduced by discontinuous fermentations for 48 hours. The kinetics of antimicrobial activity against L. monocytogenes were measured at the next fermentation times, 0, 1, 2, 6, 12, 24 and 48 hours. At each time, the antimicrobial activity of the mixed formulation was compared with the antimicrobial activity of the strains individually. The antimicrobial activity was measured by Feret's diameter, using image evaluation software. It was found that the antimicrobial activity of the mixed formulation against L. monocytogenes was stable from the second hour of fermentation to 48 hours of fermentation. After 18 hours of fermentation the mixed formulation presented superior antimicrobial activity, compared to the individual strains. The results indicate that the mixed formulation of L. brevis and W. cibaria could be a biotechnological option for the development of natural antimicrobials for the control and prevention of L. monocytogenes.