Conservación in vitro y cultivo de Cyanoprokariotas bentónicas Arrecifales de Providencia y Santa Catalina Islas, Colombia
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Type
Trabajo de grado - Maestría
Document language
EspañolPublication Date
2018-10-26Metadata
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Resumen Colombia cuenta con el 44,86% de su extensión como territorio marino, ecosistemas con organismos de gran interés para la bioprospección como las cianobacterias. Que son una fuente de productos naturales estructuralmente diversos con amplias actividades biológicas. Este trabajo de investigación pretende de manera general cultivar cyanoprokariotes bentónicas arrecifales de Providencia y Santa Catalina Islas – Colombia en condiciones de laboratorio para su conservación in vitro y producción de biomasa. Para dar cumplimiento a este objetivo el aislamiento se realizó por técnicas de rayado en agar y repiques continuos en medio nutritivo líquido BG11; obteniendo 25 cepas. Se realizaron pruebas de conservación in vitro en medios solidos nutritivos BG11 medium, C medium, ASNIII medium, Z8 medium, SN medium, F/2 medium y ES medium, suplementados con sal marina (25 g / l). durante 50 días, con una intensidad de luz de 16,2 μmol m-2 s-1, fotoperiodo 12:12 luz /oscuridad y una temperatura promedio de 23 °C. Se hicieron cinco replicas por cepa. Se evaluó el crecimiento de acuerdo con el área de colonización e intensidad de color en cada cultivo, mediante programa ImageJ (software de libre acceso). Teniendo como resultados que en el medio nutritivo ASNIII muestran mayor crecimiento los organismos de estudio. Se evaluó el efecto de la irradiancia y fotoperiodo en la producción de biomasa, clorofila a, carotenos, ficocianina, aloficocianina, ficoeritrina, proteínas, carbohidratos y lípidos en Synechococcus sp., Leptolyngbya sp. 3 y Stanieria sp. sometidos en cultivos discontinuos de 250 ml a intensidades de luz de 18,5; 55,5 y 111 μmol*m-2*s-1 y horas de exposición a la luz de 12, 14 y 16. Cada tratamiento con 6 réplicas. Encontrando que cada cepa tiene condiciones óptimas diferentes para la acumulación de biomasa, pigmentos fotosintéticos y contenido bioquímico. Se hizo un test de toxinas para microcistinas y nodularinas por ELISA y la cepa 7 dio positivo con una concentración de 0,3 μg / l. Finalmente, se realizó un estudio preliminar de bioactividad a extractos crudos de 18 cepas sobre bacterias Gram positivas, Gram negativas, hongos y cinco líneas celulares de cáncer. Los resultados arrojaron que tan solo la cepa 3 tiene inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y 11 cepas en bacterias Gram negativas. Todos los extractos crudos mostraron reducir la viabilidad de la célula de cáncer en diferentes porcentajes.Summary
Abstract: Colombia has 44.86% of its extension as a marine territory, ecosystems with organisms of great interest for bioprospecting such as cyanobacteria. They are a source of structurally diverse natural products with extensive biological activities. This research work aims in general to cultivate reef benthic cyanoprokariotes from Providencia and Santa Catalina Islas - Colombia under laboratory conditions for in vitro conservation and biomass production. In order to comply with this objective, the isolation was carried out by means of agar streaking and continuous pealing in liquid nutrient medium BG11; obtaining 25 strains. In vitro conservation tests were performed on nutritious solid media BG11 medium, C medium, ASNIII medium, Z8 medium, SN medium, F / 2 medium and ES medium, supplemented with sea salt (25 g / l). for 50 days, with a light intensity of 16.2 μmol m-2 s-1, photoperiod 12:12 light / dark and an average temperature of 23 ° C. Five replicates were made per strain. Growth was evaluated according to the area of colonization and intensity of color in each culture, by means of the ImageJ program (free access software). Taking as results that in the nutrient medium ASNIII the study organisms show higher growth. The effect of irradiance and photoperiod in the production of biomass, chlorophyll a, carotenes, phycocyanin, allophycocyanin, phycoerythrin, proteins, carbohydrates and lipids in Synechococcus sp., Leptolyngbya sp. 3 and Stanieria sp. submitted in discontinuous cultures of 250 ml at light intensities of 18.5; 55.5 and 111 μmol * m-2 * s-1 and hours of light exposure of 12, 14 and 16. Each treatment with 6 replicas. Finding that each strain has different optimal conditions for the accumulation of biomass, photosynthetic pigments and biochemical content. A toxin test was made for microcystins and nodularins by ELISA and strain 7 was positive with a concentration of 0.3 μg / l. Finally, a preliminary bioactivity study was carried out on crude extracts of 18 strains on Gram positive bacteria, Gram negative bacteria, fungi and five cancer cell lines. The results showed that only strain 3 inhibits the growth of Gram positive bacteria and 11 strains in Gram negative bacteria. All the crude extracts showed to reduce the viability of the cancer Cell in different percentages.Keywords
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