Estabilidad de dos variantes genotípicas del nucleopoliedrovirus de Spodoptera frugiperda a través de ciclos sucesivos de infección en larva

Abstract

El nucleopoliedrovirus de Spodoptera frugiperda (SfMNPV) se caracteriza por presentar una mezcla de diferentes genotipos con actividad insecticida variable. Estas diferencias pueden ser utilizadas como estrategia para la búsqueda de genotipos puros o mezclas de los mismos, cuya actividad insecticida sea óptima para el desarrollo de un bioplaguicida, para el control del gusano cogollero del maíz. En el presente trabajo se aislaron dos variantes genotípicas mediante clonación in vitro a partir del aislamiento nativo colombiano del SfMNPV (NPV003). La variante genotípica Sf-C1 presentó un perfil de restricción (REN) similar al aislamiento silvestre, mientras que la variante Sf-C2 presentó una deleción en parte de su genoma. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la estabilidad de las variantes genotípicas Sf-C1 y Sf-C2 a través de pases sucesivos en larvas de S. frugiperda. A partir de las variantes individuales recuperadas de la línea celular Sf9, se realizaron cinco pases sucesivos de multiplicación en larvas de tercer estadio. A los cuerpos de inclusión (CIs) de cada pase de multiplicación, se les determinó la patogenicidad mediante ensayos de concentración letal media (CL50) y la virulencia mediante ensayos de tiempo medio de mortalidad (TMM). La patogenicidad inicial de Sf-C1 fue 2,5 veces superior al aislamiento silvestre NPV003, lo cual le otorga potencial para ser utilizado como principio activo de un bioinsumo, mientras que la patogenicidad de Sf-C2 fue 10 veces menor. Mediante electroforesis de campo pulsado de un fragmento variable entre genotipos de SfMNPV, se observó que a partir del tercer pase sucesivo in vivo de la variante Sf-C1, aparecieron genotipos con deleción, lo cual se correlacionó con una disminución de su patogenicidad. Los resultados obtenidos contribuirán a establecer una metodología adecuada para la propagación viral que asegure la calidad del bioplaguicida.

Abstract. Spodoptera frugiperda (SfMNPV) is characterized by a mixture of different genotypes with varying insecticidal activity. These differences may be used to generate a strategy to find pure genotypes or mixtures with optimal insecticidal activity that allow the development of a biopesticide for control of the fall armyworm. In the present work two genotypic variants were cloned in vitro from the native Colombian SfMNPV isolate (NPV003). The genotypic variant Sf-C1 showed a molecular restriction pattern (REN) similar to the wild type isolate while Sf-C2 presented a genomic deletion. The aim of this work was to study the genotypic variant stability through successive passes of viral amplification in vivo, by using S. frugiperda larvae. From genotypic variants recovered from Sf-9 cells, five successive passes were done using third instar larvae. The occlusion bodies (OBs) of each amplification passage was evaluated by testing the pathogenicity by the median lethal concentration (LC50) and the virulence was studied by median time to death (MTD). The original pathogenicity of Sf-C1 was 2.5 times fold higher than the wild type isolate NPV003, which made this viral isolate a potential ingredient to be used in development of a biopesticide, while the pathogenicity of Sf.C2 .result 10 time less than the wild type. Through Pulse field Gel Electrophoresis (PFEG) of a genomic variable region present among SfMNPV genotypes was observed genomic deletions in the Sf-C1 variant during the third larvae pass. This deletion was correlated with a decrease in the viral pathogenecity. The results obtained would contribute to establish a methodology to follow (or to monitor) the quality control of the biopesticide production.