Determinacion de PD-L1 exosomal en pacientes con neoplasias avanzadas

Abstract

El campo de los biomarcadores en cáncer constituye una extensa área de investigación aún en fase de exploración. Muchas de las complicaciones asociadas con el cáncer derivan de la carencia de un diagnóstico expedito y las limitaciones para monitorear la enfermedad una vez iniciada la terapia. Las técnicas actualmente empleadas suelen requerir intervenciones invasivas o el uso de costosos equipos de imagenología, inaccesibles para gran parte de la población. Los biomarcadores presentes en biopsias líquidas, como la sangre u orina, poseen el potencial de proporcionar información sobre el estado tumoral. En este contexto, los exosomas generados por los tumores y presentes en los biofluidos ofrecen la posibilidad de medir marcadores de su membrana, garantizando un diagnóstico preciso. El presente estudio establece parámetros definidos para la recolección, procesamiento y análisis de muestras sanguíneas de pacientes con neoplasias avanzadas que expresan el marcador PD-L1 exosomal. Los exosomas derivados de la línea tumoral de cáncer de pulmón A549 y de pacientes se separan y purifican mediante columnas de afinidad y/o ultrafiltración. Posteriormente, se caracterizan mediante técnicas como la cuantificación de proteína total con Bradford, NTA, DLS, TEM y evaluación de su capacidad de inmunomodulación, alcanzando hasta un 67,16% de inhibición de la proliferación de células mononucleares de sangre periférica. Finalmente, se cuantifica la proteína PD-L1 mediante ensayos de ELISA. Se constata que los niveles de expresión de PD-L1 exosomal en los pacientes con cáncer son significativamente superiores, 10 veces más a los observados en los pacientes sanos voluntarios. Además, la cantidad de proteína PD-L1 es considerablemente más elevada (2 veces más) en las muestras de exosomas que en la fracción soluble de la sangre u orina. La medición de PD-L1 exosomal emerge como una herramienta prometedora para futuros análisis en poblaciones más extensas de pacientes con neoplasias que expresan este marcador mediante inmunohistoquímica. Esta técnica podría facilitar un seguimiento más preciso, auxiliando al oncólogo en la toma de decisiones clínicas. (Tomado de la fuente)

The field of biomarkers in cancer is a vast area of research that is still being explored. Many of the complications associated with cancer stem from the lack of an expeditious diagnosis and the limitations of monitoring the disease once therapy has been initiated. The techniques currently employed often require invasive interventions or the use of expensive imaging equipment, inaccessible to a large part of the population. Biomarkers present in liquid biopsies, such as blood or urine, have the potential to provide information on tumor status. In this context, exosomes generated by tumors and present in biofluids offer the possibility to measure markers of their membrane, guaranteeing an accurate diagnosis. The present study establishes defined parameters for the collection, processing and analysis of blood samples from patients with advanced neoplasms expressing the exosomal PD-L1 marker. Exosomes derived from the A549 lung cancer tumor line and from patients are separated and purified by affinity columns and/or ultrafiltration. Subsequently, they are characterized by techniques such as total protein quantification with Bradford, NTA, DLS, TEM and evaluation of their immunomodulation capacity, reaching up to 67.16% inhibition of peripheral blood mononuclear cell proliferation. Finally, PD-L1 protein is quantified by ELISA assays. It is found that the levels of exosomal PD-L1 expression in cancer patients are significantly higher, 10-fold higher than those observed in healthy volunteer patients. In addition, the amount of PD-L1 protein is significantly higher (2-fold) in exosome samples than in the soluble fraction of blood or urine. Measurement of exosomal PD-L1 emerges as a promising tool for future analysis in larger populations of patients with malignancies expressing this marker by immunohistochemistry. This technique could facilitate a more accurate follow-up, assisting the oncologist in clinical decision making.