Co-cultivo de células epiteliales y fibroblastos de conjuntiva

Abstract

Propósito: Desarrollar un co-cultivo de células epiteliales y fibroblastos de conjuntiva, en soportes de colágeno tipo I, que permita avanzar en el proceso de la creación de un sustituto de conjuntiva, para el tratamiento de patologías que comprometen de forma severa la superficie ocular y causan déficit visual; para que, a largo plazo, sea una alternativa a las opciones terapéuticas disponibles para estos pacientes. Método: Los cultivos primarios de células epiteliales y fibroblastos, se consiguieron a partir de biopsias de tejido conjuntival de conejos Nueva Zelanda, mediante el método de explantes, siguiendo los lineamientos establecidos por Vásquez, Pardo y Fontanilla (2009) y mediante la técnica de disgregación enzimática. Las células crecieron en dos medios de cultivo, según el tipo celular: K-SFM, para las células epiteliales, y DMEM suplementado con Suero fetal Bovino al 10% para los fibroblastos. Luego se procedió a preparar los soportes de colágeno tipo I, sembrar en ellos los fibroblastos y posteriormente las células epiteliales obtenidas, dichos co-cultivos fueron analizados mediante histología, histoquímica e inmunohistoquímica. Resultados: Se obtuvieron co-cultivos de células epiteliales y fibroblastos, comprobado mediante histología, histoquímica e inmunohistoquímica, expresados en el crecimiento de los dos tipos celulares cultivados en los soportes, que estaban dispersados en áreas diferentes para cada tipo celular; es decir, no se obtuvo la disposición anatómica que semeja la de la conjuntiva normal, mediante los métodos utilizados. Conclusiones: El trabajo realizado llevó a la obtención del crecimiento de los dos tipos celulares esperados sin que se logrará éxito en cuanto a su distribución tridimensional en el soporte. Se discuten posibles variaciones que lleven al adecuado desarrollo de un co-cultivo que permita la elaboración de sustitutos de conjuntiva.

Abstract. Purpose: The development of a co-culture of conjunctival epithelial cells and conjunctival fibroblasts in supports of collagen type I, that allows progress in the process of creation of a conjunctival substitute for treat pathologies that compromise severely the ocular surface and cause visual deficits, so that, in the long term, be an alternative to the therapeutic options available for those patients. Method: Primary cultures of cells were obtained from biopsies of conjunctival tissue of rabbits by the explants method, following the guidelines set by Vasquez, Pardo and Fontanilla (2009) and by enzymatic disaggregation technique. Cells were grown in two culture media, according to the cell type: K-SFM, for epithelial cells and DMEM supplemented with fetal calf serum to 10% for fibroblasts. Then we proceeded to prepare the collagen support of type I collagen, plant fibroblasts in it, and after plant the epithelial cells cultured. These cocultures were analized by histology, histoquemistry and inmunohistoquemistry. Results: Were obtained cocultures of epithelial cells and fibroblasts, found by histology, histoquemistry and inmunohistoquemistry, expressed in the growth of the two cell types in the supports, which were scattered in different areas for each cell type. This means that, by the methods used, was not obtained the anatomical structure that resembles that of the normal conjunctive. Conclusions: The work leading to the eventual growth of the two cell types expected without being able to succeed in their three-dimensional distribution in the supports used. Possible variations are discussed leading to the proper development of a co-culture that allows the preparation of substitutes of the conjunctive.