Estrategia para estudiar estrés hidrodinámico y por oxígeno en biorreactores de células vegetales.

Abstract

La hidrodinámica y la transferencia de oxígeno en biorreactores son fenómenos multifactoriales que pueden generar estrés en cultivos de células vegetales. En este trabajo se propuso una estrategia para estudiar diferencialmente los efectos de la velocidad de agitación, flujo de gas y concentración de oxígeno utilizando un sistema de control de oxígeno disuelto (OD) con control de flujo másico de gas. El sistema se evaluó en un cultivo modelo de Azadirachta indica con control a 30% de OD, 400 rpm y 0.08 vvm y se comparó con un sistema control convencional que manipula válvulas solenoides con un flujo variable entre 0-0.08 vvm. Con el sistema de flujo constante se encontró un control preciso de OD (± 1%), limitación en la producción de biomasa (5.2 ± 0.4 g L-1 respecto al control 12.3 ± 0.3 g L-1), viabilidad celular de 70 ± 2%, y una producción de azadiractina (0.6 ± 0.2 mg gDCW-1) 3.5 veces mayor al control. El biorreactor se mantuvo a velocidades de disipación de energía de 0.76 W kg-1 y 488-1332 kW mestela-3 produciendo escalas de Kolmogorov entre 26 ± 5 µm y 149 ± 28 µm; mientras que los agregados celulares tuvieron un diámetro de 101 ± 26 µm. No se encontró limitación por transferencia de oxígeno (Damkhöler < 1) pero el tiempo de transferencia de masa fue 14 veces mayor al tiempo de reacción del OD. La estrategia desarrollada representa un avance tecnológico para manipular condiciones operativas y estudiar el efecto de los fenómenos de transporte (movimiento y masa) en cultivos celulares. (texto tomado de la fuente)

Hydrodynamics and oxygen transfer in bioreactors cause stress in plant cell cultures. In this work, a strategy to study hydrodynamic and oxygen stress was proposed. It used a dissolved oxygen (DO) control system that maintains constant agitation and gassing. The strategy integrates calculations on hydromechanical, biochemical, geometrical, and DO transfer/uptake parameters. The system was evaluated in a model Azadirachta indica cell culture at 30% DO, 400 rpm and 0.08 vvm, and it was compared with a standard DO controller. By using constant gas flow, a precise DO control was found (± 1%), the biomass production was limited (5.2 ± 0.4 g L-1 in comparison with the control 12.3 ± 0.3 g L-1), cell viability was maintained around 70 ± 2%, and azadirachtin was produced (0.6 ± 0.2 mg gDCW-1). The bioreactor provided energy dissipation rates of 0.76 W kg-1 and 488-1332 kW mwake-3, and Kolmogorov microscales between 26 ± 5 µm and 149 ± 28 µm. Also, the most common cell aggregates size was 101 ± 26 µm. There were not oxygen transfer limitations (Damkhöler < 1), but mass transfer time was 30 times higher than DO reaction time. This strategy represents a technological advance to manipulate culture conditions in bioreactors. In this way, the study of transfer phenomena (mass and mixing) in A. indica and other plant species is possible.