Detección molecular de endosimbiontes en flebotomíneos y estimación de las preferencias de temperatura y su relación con la microbiota con énfasisen Lutzomyia longipalpis

Abstract

Due to climate change, there is an increase in tropical diseases such as leishmaniasis, transmitted by some species of the genus Lutzomyia, as Lutzomyia longipalpis, vector of Leishmania infantum in America. In addition, the microbiota of insects is known to play a role in their immunity, directly impacting their vector competence to transmit pathogens. This justifies the need to explore the composition of the microbiota, the presence of endosymbionts and their potential relationship with temperature variations in Lu. longipalpis. For this reason, the molecular detection of Arsenophonus was conducted in populations of wild phlebotomines of Lu. longipalpis, Pintomyia evansi and Psychodopygus panamensis from Colombia. Subsequently, with a device with temperature gradient "MB-Thermocline", it was evaluated the temperature preference of Lu. longipalpis, Pi. evansi while populations of Aedes aegypti were used as a control in the assay. The PCR results showed the presence of Arsenophonus and interspecific differences (p-value < 0.05) were observed between phlebotomines, specifically between 25 °C and 31 °C where there was a greater abundance of Pi. evansi found in such compartments, however both species showed a marked preference towards the temperature of 21-23 °C, while Ae. aegypti prefered temperatures between 27-29 °C. Representative groups of Lu. longipalpis that presented temperature preference (phenotypes) in each compartment of the device, were used to perform an analysis of the microbiota using New Generation Sequencing techniques. The analysis of the microbiota of these groups shows that the communities have a significantly different taxonomic structure between temperature ranges (p-value < 0.013), the most abundant genera were Pseudomonas (57.36% at 25-27 °C, 6.55% at 29-31 °C and 13.20% at 31-33 °C) and Bacillus (1.21% at 25-27 °C, 61.54% at 29-31 °C and 37.64% at 31-33 °C). It was possible to detect the natural infection of secondary endosymbionts such as Arsenophonus, Rickettsia, Spiroplasma and Asaia. Significantly, Arsenophonus is more abundant in groups of Lu. longipalpis that preferred warm temperatures (p-value < 0.02). In general, it was possible to observe that there are endosymbionts of interest that naturally infect Lu. longipalpis and that these and the microbial community vary according to the temperature to which the sand flies were exposed. This is relevant to understand the transmission dynamics of leishmaniasis and how some species may have a greater capacity to adapt to climate variability.

Debido al cambio climático, existe un aumento en enfermedades tropicales como la leishmaniasis, transmitida por algunas especies del género Lutzomyia, como Lutzomyia longipalpis, vector de Leishmania infantum en América. Además, se sabe que la microbiota de los insectos juega un papel en su inmunidad, impactando directamente su competencia vectorial para transmitir patógenos. Lo expuesto justifica la necesidad de explorar la composición de la microbiota, la presencia de endosimbiontes y su potencial relación con variaciones de temperatura en Lu. Longipalpis. Para ello se llevó a cabo la detección molecular de Arsenophonus en poblaciones de flebotomíneos silvestres de Lu. longipalpis, Pintomyia evansi y Psychodopygus panamensis de Colombia. Posteriormente, con un dispositivo con gradiente de Temperatura “MB-Termoclina”, se evaluó la preferencia de temperatura de Lu. longipalpis, Pi. evansi y se usaron poblaciones de Aedes aegypti como control en el ensayo. Los resultados de PCR mostraron la presencia de Arsenophonus y se observaron diferencias interespecíficas (valor-p < 0,05) entre flebotomíneos, específicamente entre los 25 °C y 31 °C donde se encontró una mayor abundancia de Pi. evansi en tales compartimientos, sin embargo ambas especies mostraron una marcada preferencia hacia la temperatura de 21-23 °C, mientras que Ae. aegypti prefirió temperaturas entre 27-29 °C. A grupos representativos de Lu. longipalpis que presentaron preferencia de temperaturas (fenotipos) en cada una de las cabinas del dispositivo, se les realizó un análisis de la microbiota usando la secuenciación de nueva generación. El análisis de la microbiota de estos grupos, muestra que las comunidades tienen una estructura taxonómica significativamente diferente entre rangos de temperatura (valor-p < 0.013), los géneros más abundantes fueron Pseudomonas (57.36% a los 25-27 °C, 6.55% a los 29-31 °C y 13.20% a los 31-33 °C) y Bacillus (1.21% a los 25-27 °C, 61.54% a los 29-31 °C y 37.64% a los 31-33 °C). Fue posible detectar la infección natural de endosimbiontes secundarios como Arsenophonus, Rickettsia, Spiroplasma y Asaia. Significativamente, Arsenophonus es más abundante en grupos de Lu. longipalpis que prefirieron temperaturas cálidas (valor-p< 0.02). En general, fue posible observar que existen endosimbiontes de interés que infectan de manera natural a Lu. longipalpis y que estos y la comunidad microbiana varían según la temperatura a la que fueron expuestos los flebótomos. Lo anterior es relevante para entender las dinámicas de transmisión de la leishmaniasis y como algunas especies pueden tener una mayor capacidad de adaptación a la variabilidad climática. (Texto tomado de la fuente)