Evaluación de inductores de la capacitación espermática en semen criopreservado de asnos (equus asinus)

Abstract

Las biotecnologías reproductivas, constituyen una serie de herramientas para la conservación de las razas consideradas en peligro de extinción como los burros. El objetivo de esta investigación fue evaluar el uso de inductores de capacitación espermática en semen congelado-descongelado de asnos. Se colectaron 5 asnos, localizados en el Valle de Aburrá con edades entre 4-8 años, se obtuvieron 3 eyaculados por animal, mediante vagina artificial, el semen recién recolectado fue diluido en proporción 1:1 en Equiplus® para ser criopreservado. Después, se descongelaron dos pajillas de 0.5 mL cada una del mismo eyaculado en un baño María a 37 °C, este volumen fue divido en 8 submuetras y 125 μL de semen fueron depositados en tubos eppendorf, posteriormente se adicionó a cada tubo el inductor de capacitación pentoxifilina (PTX) 2.5, 5 y 7.5 mM, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 0.5, 1 y 1.5 mM, heparina (HEP) 1.1 mM como control positivo y sin aditivo (control) por 20 minutos. Se evaluaron variables de cinética espermática sistema IVOS (Hamilton Thorne), vitalidad espermática (VE) mediante el kit de viabilidad LIVE/DEAD, integridad acrosómica con (FITC-PSA), mientras que la capacitación, potencial mitocondrial e ingreso de Ca2+, fue evaluado usando un citómetro de flujo (FORTESSA LSR, BD Biosciences, EE. UU). Se observó que la movilidad total (MT) y la vitalidad espermática (VE) aumentaron en relación con el control, con el uso de 2,5 y 5.0 mM de PTX respectivamente (p<0.05), mientras que la movilidad progresiva (MP) disminuyó para las 3 concentraciones de EDTA (p<0.05), otras variables como velocidad lineal (VSL), velocidad curvilínea (VCL), amplitud lateral de la cabeza (ALH) y frecuencia de batida (BCF) disminuyen su proporción (p<0.05) al adicionar de EDTA 1, 1.5 y PTX 7.5 mM. En cuanto a la capacitación, se encontró que las concentraciones de EDTA 1, 1.5 mM y PTX 5, 7.5 mM (p<0.01) favorecen eventos asociados a la capacitación espermática y además disminuye la concentración de Ca2+ intracelular para todas las concentraciones de PTX y EDTA 0.5 mM (p<0.01). No se observaron efectos en la actividad mitocondrial. Se concluye que la adición de PTX a 2.5, 5 mM, incrementa la proporción de la MT y VE, por el contrario, la MP disminuye al aumentar la concentración de EDTA, además cambios en la estructura de la membrana plasmática asociados a eventos de capacitación de semen congelado-descongelado de burro, puede ser modulada por la suplementación con PTX (5 mM y 7.5 mM) y EDTA (1 mM y 1.5 mM). Sin embargo, la adición de estos inductores de la capacitación, no logró influencia en el ingreso de Ca2+, por lo tanto, se requiere mayor nivel de investigación ya que los mecanismos e implicaciones en la capacitación espermática para semen de burro aún son desconocidos. (Tomado de la fuente)

Reproductive biotechnologies constitute a series of tools for the conservation of breeds considered in danger of extinction, such as donkeys. The objective of this research was to evaluate the use of sperm capacitation inducers in frozen-thawed donkey semen. Five donkeys were collected, located in the Valle de Aburrá with ages between 4-8 years, 3 ejaculates were obtained per animal, by means of an artificial vagina, the recently collected semen was diluted in a 1:1 ratio in Eplus® to be cryopreserved. Afterwards, two straws of 0.5 mL each of the same ejaculate were thawed in a water bath at 37 °C, this volume was divided into 8 sub-samples and 125 μL of semen were deposited in eppendorf tubes, later the sperm inducer was added to each tube. capacitation pentoxifylline (PTX) 2.5, 5 and 7.5 mM, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) 0.5, 1 and 1.5 mM, heparin (HEP) 1.1 mM as positive control and without additive (control) for 20 minutes. Sperm kinetic variables IVOS system (Hamilton Thorne), sperm vitality (SV) using the LIVE/DEAD viability kit, acrosomal integrity with (FITC-PSA), while capacitation, mitochondrial potential and Ca2+ ingress were evaluated. using a flow cytometer (FORTESSA LSR, BD Biosciences, USA). It was observed that the total motility (MT) and the sperm vitality (VE) increased in relation to the control, with the use of 2.5 and 5.0 mM of PTX respectively (p<0.05), while the progressive motility (MP) decreased for the 3 concentrations of EDTA (p<0.05), other variables such as linear velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL), lateral amplitude of the head (ALH) and beat frequency (BCF) decrease its proportion (p<0.05) by adding EDTA 1, 1.5 and PTX 7.5 mM. Regarding capacitation, it was found that concentrations of EDTA 1, 1.5 mM and PTX 5, 7.5 mM (p<0.01) favor events associated with sperm capacitation and also decrease intracellular Ca2+ concentration for all concentrations of PTX and 0.5mM EDTA (p<0.01). No effects on mitochondrial activity were observed. It is concluded that the addition of PTX at 2.5, 5 mM, increases the proportion of MT and VE, on the contrary, MP decreases with increasing concentration of EDTA, in addition to changes in the structure of the plasma membrane associated with capacitation events. of frozen-thawed donkey semen, can be modulated by supplementation with PTX (5 mM and 7.5 mM) and EDTA (1 mM and 1.5 mM). However, the addition of these capacitation inducers did not influence Ca2+ entry, therefore, a higher level of research is required since the mechanisms and implications in sperm capacitation for donkey semen are still unknown.