Concordancia entre la expresión del Gen mec A determinada por PCR en tiempo real en aislamientos clínicos de Staphylococcus coagulasa negativa y el perfil de susceptibilidad microbiana

Abstract

La Sepsis y la bacteremia, son las principales causas de morbimortalidad neonatal en los recién nacidos, especialmente los prematuros que son más susceptibles de adquirir este tipo de infecciones, especialmente por hospitalización prolongada, lo que conlleva al uso de dispositivos artificiales y al uso indiscriminado de antimicrobianos, favoreciendo la aparición de mecanismos de resistencia, como el Gen mec A, el cual es el componente genético central de resistencia a β-láctamicos. Este estudio contribuye al diagnóstico de infecciones nosocomiales y resolución de las discrepancias entre el estudio genotípico y fenotípico de cepas causantes de Sepsis neonatal, puede constituir un modelo para extrapolar en entidades hospitalarias. Se determinó en 61 cepas de SCN, la presencia y expresión del Gen mec A, utilizando la técnica de PCR y qPCR, para la qPCR se estandarizó la extracción de RNA, previa realización de curvas de crecimiento bacteriano, La RT- PCR se realizó en uno y dos pasos; en la cuantificación absoluta se empleo sonda Taqman. En la cuantificación relativa se utilizó los genes normalizadores 16srRNA y tpi, para esta cuantificación, se utilizó Sybrgreen. De los Staphylococcus coagulasa negativa, el S.epidermidis fue hallado con mayor frecuencia en los aislamientos neonatales. La frecuencia fue del 80.33%, frente a un 19.67% de otros SCN; con una prevalencia de la presencia del gen del 90%. En la determinación de la expresión del gen, utilizando dos tipos de cuantificación produjeron resultados comparables. En conclusión, existe concordancia moderada entre la presencia/expresión del Gen mec A y el perfil de susceptibilidad microbiana. / Abstract. The Sepsis and the bacteremia, are the principal reasons of Neonatal morbidity in the newborn children, specially the premature babies who are more capable of acquiring this type of infections, specially for long hospitalization, which carries to the use of artificial devices and to the indiscriminate use of antimicrobial, favoring the appearance of mechanisms of resistance, as the Gene mec A, which is the genetic central component of resistance to β-láctamicos. This study contributes to the diagnosis of nosocomial infections and resolution of the discrepancies between the genotypic and phenotypic study of causative vine-stocks of Sepsis neonatal, can constitute a model to extrapolate in hospitable entities. It determine in 61 SCN vine-stocks, the presence and expression of the Gene mec A, using PCR technology and qPCR, for the qPCR I standardize RNA extraction, previous accomplishment of curves of bacterial growth, The RT - PCR I realize in one and two steps; in the absolute quantification I use probe Taqman. In the relative quantification I use the normalizing genes 16srRNA and tpi, for this quantification, Sybrgreen was in use. Of the Staphylococcus coagulasa negative, the S.epidermidis was found by major frequency in the isolations neonatal. The frequency was 80.33%, opposite to 19.67% of other SCN; with a prevalence of the presence of the gene of 90%. In the determination of the expression of the gene, using two types of quantification they produced comparable results. In conclusion, there exists conformity moderated between the presence/expression of the Gene mec A and the profile of microbial susceptibility.