Evaluación del efecto citotóxico del extracto etanólico y fracciones obtenidas de hojas de Erythroxylum novogranatense var. novogranatense en líneas celulares de glioblastoma

Abstract

El glioblastoma multiforme es el tumor maligno más frecuente del sistema nervioso central, con una mediana de supervivencia inferior a dos años. Este estudio evaluó el efecto citotóxico del extracto etanólico y de fracciones de diferente polaridad obtenidas de hojas de E. novogranatense en las líneas celulares U87MG y T98G. Los extractos se obtuvieron por percolación y el fraccionamiento líquido-líquido empleó solventes de distinta polaridad. La citotoxicidad se determinó mediante el ensayo de MTT, calculando la concentración inhibitoria 50 (CI50), mientras que los metabolitos secundarios fueron caracterizados por cromatografía de capa delgada. Adicionalmente, se realizaron análisis de western blot para evaluar la fosforilación de AKT, así como ensayos de inmunofluorescencia y RT-qPCR para explorar el mecanismo de muerte celular.

El extracto etanólico mostró la presencia de alcaloides y flavonoides, con CI50 de 233 µg/mL en U87MG y 170 µg/mL en T98G a las 48 horas. La fracción de cloroformo exhibió mayor actividad, con CI50 de 60 µg/mL en U87MG y 120 µg/mL en T98G. No se detectaron cambios significativos en la fosforilación de AKT. En U87MG, la citotoxicidad se relacionó con apoptosis mediada por activación de caspasa-3, mientras que en T98G los hallazgos sugieren un mecanismo alternativo. Asimismo, ambos tratamientos redujeron significativamente la migración celular. En conclusión, el extracto etanólico y la fracción de cloroformo de E. novogranatense presentaron un efecto citotóxico leve a moderado en las líneas evaluadas, con apoptosis en U87MG y un mecanismo no definido en T98G. (Texto tomado de la fuente)

Glioblastoma multiforme is the most frequent malignant tumor of the central nervous system, with a median survival of less than two years. This study evaluated the cytotoxic effect of the ethanolic extract and fractions of different polarity obtained from leaves of E. novogranatense in U87MG and T98G cell lines. Extracts were obtained by percolation, and liquid-liquid fractionation was performed using solvents of varying polarity. Cytotoxicity was determined using the MTT assay, with calculation of the half maximal inhibitory concentration (IC50), while secondary metabolites were characterized by thin-layer chromatography. In addition, western blot analyses were performed to assess AKT phosphorylation, along with immunofluorescence and RT-qPCR assays to investigate the mechanism of cell death.

The ethanolic extract revealed the presence of alkaloids and flavonoids, with IC50 values of 233 µg/mL in U87MG and 170 µg/mL in T98G after 48 hours. The chloroform fraction exhibited greater activity, with IC50 values of 60 µg/mL in U87MG and 120 µg/mL in T98G. No significant changes in AKT phosphorylation were detected. In U87MG, cytotoxicity was associated with apoptosis mediated by caspase-3 activation, whereas in T98G, the findings suggest an alternative mechanism. Furthermore, both treatments significantly reduced cell migration. In conclusion, the ethanolic extract and chloroform fraction of E. novogranatense exhibited mild to moderate cytotoxic effects in the evaluated cell lines, with evidence of apoptosis in U87MG and an undefined mechanism in T98G.