Caracterización morfológica y molecular de Trypanosoma spp. en anuros de ecosistemas tropicales en Colombia

Abstract

El segundo grupo más biodiverso de Colombia, los anuros, son susceptibles a infecciones por parásitos como Trypanosoma spp. pero son escasas las investigaciones relacionadas en el país. Este estudio analizó 434 muestras (56 especies de anuros de 7 localidades de Colombia) depositadas en la colección biológica Grupo de Estudio Relación Parásito Hospedero (GERPH), con el objetivo de determinar la diversidad morfológica, molecular y las relaciones filogenéticas de Trypanosoma spp. Se realizó diagnóstico microscópico, y descripciones morfológicas usando 13 variables cuantitativas y 11 categóricas. Se aplicaron análisis estadísticos (PCA, ANOSIM, PERMANOVA, Distancia de Gower) para evaluar segregación entre morfotipos. Se desarrolló cultivo de Trypanosoma de Rhinella horribilis en medio NNN y se estandarizó protocolo de PCR anidada para amplificar un fragmento de 18S rRNA de 900 pb. Se realizaron análisis filogenéticos de máxima verosimilitud y distancias genéticas usando las secuencias obtenidas y varias reportadas en otros hospederos. Mediante morfología se lograron caracterizar 12 morfotipos de Trypanosoma en anuros. Las pruebas estadísticas comprobaron la utilidad del uso de datos mixtos para la clasificación de morfotipos. Se logró el mantenimiento ex situ del modelo animal Rhinella horribilis, permitiendo la estandarización del cultivo de Trypanosoma y la obtención del control positivo para pruebas moleculares. El protocolo molecular permitió obtener y asignar secuencias BarCode a cuatro morfotipos. Filogenéticamente, se estableció correspondencia del morfotipo I con Trypanosoma tungarae, el morfotipo II con una nueva especie, la cual denominamos Trypanosoma homochattoni n.sp., y los morfotipos III y IV con un complejo relacionado con Trypanosoma tokoloshi (Texto tomado de la fuente).

The second most biodiverse group in Colombia, anurans, are susceptible to infections by parasites such as Trypanosoma spp., but related research in the country is scarce. In this study, 434 samples (56 species of anurans from 10 localities in Colombia) deposited in the biological collection Grupo de Estudio Relación Parásito Hospedero (GERPH) were analyzed with the aim of determining the morphological and molecular diversity, and the phylogenetic relationships of Trypanosoma spp. Microscopic diagnosis and morphological descriptions were performed using 13 quantitative and 11 categorical variables. Statistical analyses (PCA, ANOSIM, PERMANOVA, Gower's distance) were used to evaluate the segregation between morphotypes. The trypanosome culture of Rhinella horribilis was optimized in NNN medium and the nested PCR protocol was standardized to amplify a 900 bp 18S rRNA fragment. Phylogenetic analyses of maximum likelihood and genetic distances were performed using the sequences obtained and several reported in other hosts. Morphology was used to characterize 12 morphotypes of trypanosomes in anurans. Statistical tests demonstrated the effectiveness of using mixed data for morphotype classification. The ex situ maintenance of Rhinella horribilis as an animal model was successful, allowing the standardization of the trypanosome culture and obtaining the positive control for molecular tests. The molecular protocol allowed the acquisition and assignment of BarCode sequences to four morphotypes. Phylogenetically, we established the correspondence of morphotype I with Trypanosoma tungarae, morphotype II with a new species, which we named Trypanosoma homochattoni n.sp., and morphotypes III and IV as part of a complex related to Trypanosoma tokoloshi.