Parámetros metabólicos, antioxidantes y competencia para el desarrollo embrionario de ovocitos bovinos madurados in vitro con L-Carnitina

Abstract

La L-Carnitina(L-C) es una molécula con una reconocida función en el metabolismo lipídico y con propiedades antioxidantes, lo que la convierte en un potencial suplemento para estudiar en sistemas celulares con alteraciones en el metabolismo lipíco y en la generación de especies reactivas de oxígeno (EROs). El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la L-C durante la maduración in vitro (MIV) de ovocitos bovinos sobre diferentes parámetros asociados a la calidad de este. Los complejos ovocito cúmulo (CCOs) fueron madurados por 24 horas con o sin L-C (3.8 mM). Se determinó la cantidad de lípidos con Rojo Nilo, la actividad mitocondrial con Mitotracker green, los niveles de EROs con diclorofluoresceina diacetato H2DCFDA y la cantidad de glutatión reducido (GSH) con Monochlorobimane (mBCI); la intensidad de fluorescencia (IF) fue normalizada con la media del grupo control. Se corroboró la expresión de los transcriptos CPT1A, CPT1B y CPT2, por RT- PCR apartir del RNA extraido de los ovocitos MIV. Para evaluar el efecto de la L-C sobre el desarrollo embrionario, los CCOs maduros fueron fertilizados y cultivados por 8 días; se determinó % clivaje y % blastocistos. Los datos fueron analizados por ANOVA y las medias comparadas por test de Tukey. En este trabajo se corroboró la presencia de CPT1A, CPT1B y CPT2, y se encontró que los ovocitos madurados conL-Cdisminuyeron en 8.1% la cantidad relativa de lípidos y en 41.6% la de EROs, aumentaron en un 160% la actividad mitocondrial y en 10% el porcentaje de blastocistos al día 7, pero no se encontró efecto sobre la cantidad de GSH. En conclusión, con base en estos hallazgos se postula la L-Carnitina como un suplemento durante la maduración del ovocito de bovino para mejorar su calidad y competencia para el desarrollo embrionario.

Abstract: L-Carnitine (L-C) is a molecule with a recognized function in lipid metabolism and with antioxidant properties, which makes it a potential supplement to study in cellular systems with alterations in lipid metabolism and in the generation of reactive species of oxygen (EROs). The objective of this work was to evaluate the effect of L-C during the in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes on different parameters associated with the quality of this. The oocyte cumulus complexes (CCOs) were matured for 24 hours with or without L-C (3.8 mM). The amount of lipids with Nile Red, the mitochondrial activity with Mitotracker green, the levels of EROs with dichlorofluorescein diacetate H2DCFDA and the amount of reduced glutathione (GSH) with Monochlorobimane (mBCI); the fluorescence intensity (IF) was normalized with the mean of the control group. The expression of the CPT1A, CPT1B and CPT2 transcripts was corroborated by RT-PCR from the RNA extracted from the MIV oocytes. To evaluate the effect of L-C on embryonic development, mature CCOs were fertilized and cultured for 8 days; % cleavage and % blastocysts were determined. The data were analyzed by ANOVA and the means compared by Tukey test. In this work the presence of CPT1A, CPT1B and CPT2 was corroborated, and it was found that oocytes matured with L-C decreased in 8.1% the relative amount of lipids and in 41.6% that of EROs, increased mitochondrial activity by 160% and 10% the percentage of blastocysts at day 7, but no effect on the amount of GSH was found. In conclusion, based on these findings, L-Carnitine is postulated as a supplement during the maturation of the bovine oocyte to improve its quality and competence for embryonic development.