Análisis in vitro de la viabilidad fibroblastos gingivales en asociación con Escherichia coli

Abstract

El propósito de esta investigación fue el de infectar monocapas de fibroblastos gingivales humanos (FGH) con aislamientos clínicos de Escherichia coli para determinar alteraciones en la viabilidad de estas células. Los fibroblastos gingivales fueron obtenidos a partir de biopsias gingivales de tejidos clínicamente no inflamados de pacientes adultos jóvenes que asistieron a la clínica de cirugía de la Facultad de Odontología de la Universidad Nacional de Colombia. Los cultivos primarios y crecimiento de fibroblastos se realizaron de acuerdo con el protocolo establecido por Freshney (2000) empleándose el método de cultivo estacionario o en monocapa. La obtención de la cepa de Escherichia coli se hizo a partir del surco gingival de pacientes adultos con Periodontitis crónica moderada ó severa que asistieron a la consulta externa en las clínicas odontológicas de la facultad de Odontología. Al evaluar in vitro el posible daño de una de las células del tejido periodontal por Escherichia coli se podría proveer información para entender el papel que pueden jugar las enterobacterias en la etiopatogenia de la enfermedad periodontal. Se demostró que el aislamiento clínico de Escherichia coli puede alterar in vitro la viabilidad de los fibroblastos gingivales humanos induciendo apoptosis temprana después de dos horas de infección, a una dosis infectante (MOI) de 50:1. Con este trabajo es la primera vez que se evalúan aislamientos clínicos de enterobacterias induciendo alteraciones en la viabilidad de los FGH. También es la primera vez en estudiarse la apoptosis de los FGH inducida por una enterobacteria aislada de cavidad oral. / Abstract. The main goal of this investigation was to infect monolayers of human gingival fibroblasts (HGF) with clinical isolations of Escherichia coli to determine alterations in the viability of these cells. The gingival fibroblasts were obtained from clinical not inflamed gingival biopsies of adult young patients who were present at the surgery clinic of the Odontology Faculty of the National University of Colombia. The primary cultures and growth of fibroblasts were realized in agreement by the protocol established by Freshney (2000) using the method of stationary culture or in monolayer. The obtaining of the Escherichia coli`s sample was taken from the gingival pocket of adult patients with chronic moderate or severe Periodontitis who were attended at the external consultation of the Dentistry Clinics of the National University of Colombia. On having evaluated in vitro the possible damage of one of the most important cells of the periodontal tissue by Escherichia coli it might provide information for the understanding of the paper that the enteric bacterias can play in the pathogenesis of human periodontal disease. There was demonstrated that the oral clinical isolation of Escherichia coli can alter in vitro the viability of the human gingival fibroblasts inducing early apoptosis after two hours of infection, with an infecting dose (MOI) of 50:1. With this work it is the first time that clinical isolations of enteric bacterias are evaluated, by means of infecting and inducing alterations in the viability of the HGF; also is the fist time that apoptosis of the HGF was measured induced by an enteric bacteria isolated from oral cavity.