Protocolo para el diagnóstico de Candidiasis Invasiva mediante amplificación de DNA ribosomal por PCR semi-nidada en muestras de plasma

Abstract

Las infecciones micóticas son propias del paciente inmunocomprometido o severamente invadido. Se ha reconocido el riesgo mayor de invasión por Candida en pacientes neutropénicos, pero actualmente hay otras poblaciones de pacientes críticos no-neutropénicos en alto riesgo de infección. La candidiasis invasiva es la cuarta causa de infección del torrente circulatorio en el ambiente hospitalario, con una mortalidad atribuible de hasta el 50%. El método estándar de diagnóstico se basa en hemocultivos, los cuales tienen un rendimiento del 50% según se ha documentado por estudios post mortem. Los análisis preliminares han demostrado alta precisión para pruebas de diagnóstico molecular por PCR en infecciones micóticas amplificando DNA ribosomal; sin embargo, dichos estudios no se han validado con el uso de muestras clínicas. Nuestra intención es estandarizar el método para la amplificación de DNA ribosomal con Cebadores pre-elaborados que amplifican la región ITS 2 completa de Candida spp. y mediante protocolo de PCR nidada, amplificar segmentos específicos de 9 especies clínicamente relevantes de Candida, esta vez a partir de muestras clínicas de sangre. Se protocolizará dicha técnica en muestras de sangre para así ponerla en práctica posteriormente en un ensayo comparativo de efectividad diagnóstica de las diversas técnicas de diagnóstico actualmente disponibles para candidiasis invasiva. / Abstract: Fungal infections are characteristic of severely immunocompromised patient or invaded. It has recognized the increased risk of invasion by Candida in neutropenic patients, but today there are other populations of non-neutropenic critically ill patients at high risk of infection. Invasive candidiasis is the fourth leading cause of bloodstream infection in the hospital environment, with an attributable mortality of up to 50%. The standard method of diagnosis is based on blood cultures, which have an efficiency of 50% as documented by postmortem studies. Preliminary tests have shown high accuracy for molecular diagnostic tests for fungal infections PCR amplified ribosomal DNA, but such studies have not been validated using clinical samples. Our intention is to standardize the method for ribosomal DNA amplification with primers that amplify pre-processed the complete ITS 2 region of Candida spp. and by nest-PCR protocol, amplify specific segments of 9 clinically relevant Candida species, this time from clinical samples of blood. It formalizes the technique on blood samples and subsequently implement it in a comparative test of diagnostic effectiveness of various diagnostic techniques currently available for invasive candidiasis