Identificación de mutaciones relacionadas con resistencia a quinolonas en aislados clínicos de Pseudomonas aeruginosa

Abstract

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) es un patógeno oportunista y uno de los principales responsables de infecciones nosocomiales alrededor del mundo. Muchos aislados clínicos de esta bacteria presentan resistencia a quinolonas, observándose que los provenientes de pacientes con fibrosis quística (FQ) son más resistentes que los de otras infecciones. El objetivo de este trabajo fue identificar mutaciones en la región determinante de resistencia a quinolonas (QRDR) del gen gyrA que codifica para la subunidad A de la enzima ADN girasa, blanco de estos antibióticos. Se estudiaron 60 aislados clínicos nativos de P. aeruginosa, la mitad de ellos obtenidos de pacientes con FQ y el resto obtenidos de otras patologías (no FQ). Se realizaron ensayos de susceptibilidad a levofloxacina por medio de la técnica de microdilución en caldo, encontrándose que, de todos los aislados, un 48.3%fueron resistentes, un 6.7% intermedias y un 45% sensibles a levofloxacina.El 44.8% de los aislados resistentes fue de origen FQ y el 55.2% no FQ, una diferencia no significativa (p=0,26). Mediante la técnica de PCR se amplificó la región QRDR del gen gyrA y los productos amplificados fueron secuenciados y analizados con el fin de identificar mutaciones. Los resultados de secuenciación fueron útiles para 44 de los 60 aislados, y permitieron identificar las siguientes mutaciones: Met101Leu, Gln106Lys y Gln106Arg, en frecuencias del 100, 22.7 y 31.8%. No se encontró asociación significativa entre las mutaciones y el origen clínico de los aislados (p=0,11); tampoco se encontró asociación entre las mutaciones identificadas y la resistencia a levofloxacina (p=0,99). Estos resultados sugieren la existencia de mecanismos alternativos como base de la resistencia a levofloxacina en los aisladosclínicos estudiados.

Abstract. Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is an opportunistic pathogen and one of the main causes of nosocomial infections worldwide. Many clinical isolates of this bacterium are resistant to quinolones, observing that from cystic fibrosis (CF) patients are more resistant than other infections. The aim of this work was to identify mutations in the quinolone resistance determinant region (QRDR) in the gyrA gene that encodes the subunit A of DNA gyrase enzyme, target of these antibiotics. We studied 60 clinical isolates of native P. aeruginosa, half of them from CF patients and the remainder obtained from other pathologies (no CF). Susceptibility assays were performed using levofloxacin through broth microdilution technique finding that 48.3% of the strains were resistant, 6.7% intermediate and 45% sensitiveto levofloxacin. 44.8% of the resistant isolates was from CF patients and 55.2% from no CF, this difference was not significant (p = 0,26). By PCR was amplified QRDR ofgyrA gene and the amplified products were sequenced and analyzed in order to identify mutations. The sequencing results were useful for 44 of the 60 isolates and they allowed to identify the following mutations: Met101Leu, Gln106Lys and Gln106Arg, whit frequencies of 100, 22.7 and 31.8%. Significant association between mutations and clinical origin of the isolates wasn’t found (p = 0.11),association among the mutations identified and levofloxacin resistance neither wasn’t found(p = 0.99). These results suggest the existence of alternative mechanismsas the basis of resistance to levofloxacin in the clinical isolates studied.