Caracterización de la microbiota asociada a los biotipos de Spodoptera frugiperda SMITH (Lepidoptera: Noctuidae)

Abstract

Spodoptera frugiperda (J.E. Smith), también conocida como gusano cogollero (FAW), es una plaga polífaga que causa importantes pérdidas económicas en una amplia variedad de cultivos. Presenta dos biotipos (maíz y arroz) que están genéticamente diferenciados, tienen aislamiento reproductivo y difieren en su resistencia a las toxinas de Bt e insecticidas. El microbioma asociado a FAW podría desempeñar un papel relevante en su éxito evolutivo y adaptativo. La información relacionada con el microbioma de FAW es limitada y se desconocen las diferencias en la estructura de las comunidades bacterianas según el biotipo y a lo largo de su ciclo de vida. En este trabajo, se llevó a cabo la caracterización de la microbiota asociada a los biotipos arroz (RS) y maíz (CS) de FAW durante las diferentes fases de su desarrollo. Para ello se colectaron larvas de FAW de cultivos de arroz y maíz. Se realizó la genotipificación de los insectos mediante los marcadores moleculares COI y FR. Se obtuvieron muestras de tejidos intestinales de adultos (machos y hembras) y de larvas (jóvenes y tardías). También se estudió la microbiota presente en huevos y pupas del insecto. A través de secuenciación de alto rendimiento del gen bacteriano 16S ARNr por la tecnología Illumina MySeq, se logró determinar que Firmicutes y Proteobacteria fueron los phyla dominantes durante la metamorfosis del insecto en CS y RS. La mayor riqueza observada de ASV (Amplicon Sequence Variants) se encontró en muestras de huevos. Los géneros Illeobacterium, Ralstonia y Burkholderia mostraron abundancias relativas similares en machos adultos y huevos. El género Carnobacterium tuvo una abundancia significativa en el estado de pupa en RS y CS. Enterococcus fue el género predominante en todas las muestras. El análisis de PCoA basado en el análisis de disimilitud de Bray-Curtis indicó que no había diferencias significativas entre las comunidades bacterianas de CS y RS. Sin embargo, se observó que la composición de los ASV difería significativamente entre muestras de diferentes etapas del ciclo de desarrollo del insecto. El análisis discriminante lineal (LDA) reveló una abundancia diferencial significativa para ocho géneros de bacterias entre muestras de cepas de arroz y maíz. Los géneros Klebsiella, Dermacoccus, A2 (familia Lachnospiraceae), Lachnoclostridium, Faecalibaculum y Leuconostoc fueron identificados como los taxones más predominantes en RS, mientras que Arsenophonus y Weissella tuvieron una abundancia significativa CS. Los endosimbiontes Arsenophonus y Spiroplasma presentaron una correlación positiva entre CS y RS respectivamente. Se logró establecer un nucleo microbiano a nivel de género conformado por Enterococcus e Ileobacterium. Se aislaron y caracterizaron 37 aislamientos bacterianos mediante secuenciación del ADNr 16S, encontrándose que la bacteria predominante en todos los tejidos correspondía a la especie Enterococcus mundtii. Se identificaron otras bacterias de los géneros Enterobacter, Leclercia, Carnobacterium, Pediococus, Bacillus, Cellulomonas, Curtobacterium, Paenibacillus y Staphylococcus. Los resultados de este trabajo son relevantes para entender el papel que desempeñan los simbiontes microbianos en FAW. Los endosimbiontes Spiroplasma y Arsenophonus asociados con los biotipos arroz y maíz, podrían tener una potencial aplicación en el biocontrol de este insecto plaga. (Texto tomado de la fuente)

Spodoptera frugiperda (J.E. Smith), also known as Fall Army Worm (FAW), is a polyphagous pest that causes significant economic losses in a wide variety of crops. It has two strains (corn and rice) that are genetically differentiated, have reproductive isolation, and differ in their resistance to Bt toxins and insecticides. The microbiome associated with FAW could play a relevant role in its evolutionary and adaptive success. Information related to the microbiome of FAW is limited and differences in bacterial community structure according to strains and throughout their life cycle are unknown. In this work, we characterize the corn strain (CS) and rice strain (RS) associated microbiota of FAW during the different stages of their life cycle. For this purpose, FAW larvae were collected from rice and corn crops The insects were genotyped using the molecular markers COI and FR. Intestinal tissue samples were obtained from adults (males and females) and larvae (young and late). The microbiota present in eggs and pupae of the insect was also studied. Through high-throughput sequencing of the bacterial 16S rRNA gene by Illumina MySeq technology, it was determined that Firmicutes and Proteobacteria were the dominant phyla during the metamorphosis of the insect in CS and RS. The highest observed richness of ASV (Amplicon Sequence Variants) was found in egg samples. Illeobacterium, Ralstonia and Burkholderia genera showed similar relative abundances in adult males and eggs. Carnobacterium genus had significant abundance in the pupal stage in RS and CS. Enterococcus was the predominant genus in all samples. PCoA analysis based on BrayCurtis dissimilarity analysis indicated that there were no significant differences between the bacterial communities of CS and RS. However, the composition of ASVs was observed to differ significantly between samples from different stages of the insect development cycle. Linear discriminant analysis (LDA) combined with effect size measures (LEfSe) revealed significant differential abundance for 8 bacterial genera between rice and maize strain samples. Klebsiella, Dermacoccus, A2 (Lachnospiraceae family), Lachnoclostridium, Faecalibaculum and Leuconostoc genera were identified as the most predominant taxa in RS, while Arsenophonus and Weissella had significant abundance in CS. A positive correlation was found between Arsenophonus and CS and a positive correlation between Spiroplasma and RS. A microbial core was established at the genus level consisting of Enterococcus and Ileobacterium. Additionally, 87 bacterial isolates were obtained in pure cultures, 37 of which were characterized by 16S rDNA sequencing. It was found that the predominant bacterium in all tissues corresponded to the species Enterococcus mundtii, the genetic affiliation at the species level was confirmed through sequencing of the gyrB gene. Enterobacter, Leclercia, Carnobacterium, Pediococus, Bacillus, Cellulomonas, Curtobacterium, Paenibacillus and Staphylococcus genera were also identified. These results are relevant for the understanding of the role of microbial symbionts in FAW and for the development of new strategies for the control of insect pests. Spiroplasma and Arsenophonus endosymbionts associated with rice and corn strains could have a potential application in the biocontrol of this insect pest.