Caracterización de variantes en el exón 28 del gen VWF y su correlación genotipo-fenotipo en una muestra de pacientes con enfermedad de Von Willebrand tipo 2

Abstract

El diagnóstico de la Efermedad de Von Willebrad se basa en pruebas de laboratorio especializadas que dependen de condiciones preanalíticas como la toma de la muestra, transporte y almacenamiento de las mismas, analíticas como el tipo de test utilizado, procedimientos de laboratorio y manejo de las muestras y post-analíticas como la correcta emisión y correlación de los resultados de acuerdo al analito estudiado que pueden llevar a resultados no óptimos. Según las guías para el diagnóstico de la enfermedad de Von Willebrand propuestas por la AHS, ISTH, NHF, y WFH, en la discriminación de los tipos 2 A, 2B, 2M y 2 N, el análisis genético es la opción que brinda un apoyo al diagnóstico clínico y del laboratorio que permite un mejor abordaje terapéutico y la oportunidad de brindar la asesoría genética adecuada. El objetivo de este trabajo fue caracterizar las variantes en el exón 28 del gen VWF y realizar la correlación genotipo-fenotipo en una muestra de pacientes con Enfermedad de Von Willebrand (EvW) tipo 2 en una institución de la ciudad de Bogotá D.C., Colombia. Para esto se analizaron 20 muestras de pacientes previamente diagnosticados con Enfermedad de Von Willebrand tipo 2, 17 de ellos no relacionados, que asisten al programa de Hemofilia de la Clínica Infantil Colsubsidio. Se realizó análisis del Exón 28 del gen VWF, mediante amplificación por PCR y secuenciación Sanger con el Kit Big Dye Terminator V3.1 en un analizador genético ABI 3500. Se identificó la variante patogénica en 15 de los 17 (88.2%) pacientes no relacionados analizados. En total, se identificaron 9 variantes patogénicas en la cohorte de pacientes analizados. La variante p.Gly1609Arg fue identificada en el 52.9% de los pacientes analizados (n=9) sola o en combinación, seguido en frecuencia por p.Ile1425Phe (n=3), y p.Ala1437Thr (n=3) sola o en combinación, 1 paciente con p.Arg1597Trp y otro con p.Arg1334Trp. Adicionalmente, en el 31.6% (n=6) de los pacientes se identificaron dos variantes patogénicas (2 pacientes conp.Gly1609Arg/p.Ala1437Thr; 1 paciente p.Gly1609Arg/p.Ser1506Leu; 1 paciente p.Gly1609Arg/p.Arg1597Trp; 1 paciente p.Gly1609Arg/p.Val1279Phe; y 1 paciente p.Ile1628Thr/p.Ser1325Phe). No se identificó variante en 2 pacientes (11.8%). Se pudo reclasificar el subtipo EvW tipo 2 en el 40% (n=8) de pacientes. En el 15% (n=3) no tenían estudios de laboratorio como el análisis de multímeros para su correcta correlación. Este es el primer estudio realizado en el país, el cual permitió identificar la causa genética de EvW por primera vez en Colombia mediante la secuenciación de exones específicos en una cohorte de seguimiento, realizar una correlación genotipo-fenotipo y brindar asesoramiento genético a los pacientes y sus familias. (Texto tomado de la fuente).

The diagnosis of Von Willebrad disease is based on specialized laboratory tests that depend on pre-analytical conditions such as sample collection, transport and storage, analytical conditions such as the type of test used, laboratory procedures and sample handling, and post-analytical conditions such as the correct emission and correlation of the results according to the analyte studied, which can lead to suboptimal results. According to the guidelines for the diagnosis of von Willebrand disease proposed by the AHS, ISTH, NHF, and WFH, in the discrimination of types 2A, 2B, 2M and 2N, genetic analysis is the option that provides support to clinical and laboratory diagnosis that allows a better therapeutic approach and the opportunity to provide appropriate genetic counseling. The aim of this work was to characterize the variants in exon 28 of the VWF gene and to perform the genotype-phenotype correlation in a sample of patients with Von Willebrand Disease (VWD) type 2 in an institution in the city of Bogotá D.C., Colombia. For this purpose, 20 samples of patients previously diagnosed with Von Willebrand Disease type 2, 17 of them unrelated, attending the Hemophilia program of the Colsubsidio Children's Clinic were analyzed. Analysis of Exon 28 of the VWF gene was performed by PCR amplification and Sanger sequencing with the Big Dye Terminator V3.1 kit in an ABI 3500 genetic analyzer. The pathogenic variant was identified in 15 of the 17 (88.2%) unrelated patients analyzed. In total, 9 pathogenic variants were identified in the cohort of patients analyzed. The p.Gly1609Arg variant was identified in 52.9% of the patients analyzed (n=9) alone or in combination, followed in frequency by p.Ile1425Phe (n=3), and p.Ala1437Thr (n=3) alone or in combination, 1 patient with p.Arg1597Trp and another with p.Arg1334Trp. Additionally, two pathogenic variants were identified in 31.6% (n=6) of patients (2 patients with p.Gly1609Arg/p.Ala1437Thr; 1 patient p.Gly1609Arg/p.Ser1506Leu; 1 patient p.Gly1609Arg/p.Arg1597Trp; 1 patient p.Gly1609Arg/p.Val1279Phe; and 1 patient p.Ile1628Thr/p.Ser1325Phe). No variant was identified in 2 patients (11.8%). It was possible to reclassify the EvW type 2 subtype in 40% (n=8) of patients. In 15% (n=3) they did not have laboratory studies such as multimer analysis for correct correlation. This is the first study performed in the country, which made it possible to identify the genetic cause of EvW for the first time in Colombia by sequencing specific exons in a follow-up cohort, to perform a genotype-phenotype correlation and to provide genetic counseling to patients and their families.